课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀教学设计

专题八

选修一生物技术实践

第1～2课时 生物技术实践

永州市2019年生物高考研究团队

【研究5年湖南高考真题，寻找湖南卷命题规律，探索二轮复习方法】

1．【2014年湖南高考真题39.生物——选修1 生物技术实践】（15分）

植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解，回答下列问题：

（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中葡萄糖苷酶可将 分解成 。

（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成 色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 。

（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养（成分见下表）：

培养基甲

培养基乙

酵母膏

+ + 无机盐

+ + 淀粉

纤维素粉

+ + + - 琼脂

CR溶液

- + + + 水

+ + 据表判断，培养基甲 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；培养基乙 （填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 。

解析：

（1）微生物产生的纤维素酶是一种复合酶，包括内切酶（Cx酶）、外切酶（C1酶）和葡萄糖苷酶．其中的葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解成葡萄糖．

（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成红色复合物．用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈．

（3）分析表格可知，培养基甲为液体培养基，不能用于分离和鉴别纤维素分解菌，纤维素分解菌鉴别培养基属于固体培养基．培养基乙没有纤维素，因此也不能用于分离和鉴别纤维素分解菌．

故答案为：

高考阅卷参考答案：

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（1）纤维二糖 葡萄糖（2）红 透明圈 （3）不能 液体培养基不能用于分离单菌落 不能 培养基中没有纤维素，不会形成CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌

2．【2015年湖南高考真题39.生物——选修1 生物技术实践】（15分）

已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用于 染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用 （填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以 为碳源的固体培养基进行培养。

（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用 直接计数；若要测定其活菌数量，可选用 法进行计数。

（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中， ℃条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕

℃设计后续实验。

解析：

（1）脂肪可被苏丹Ⅲ（Ⅳ）染液染成橘黄色（红色）；题干中说明微生物A产生的油脂不易挥发，则可以采用萃取法提取微生物A中的脂肪。

（2）油脂为有机化合物，富含C元素，故为了从自然界获得能够分解油脂的单菌落，应以油脂为唯一碳源来配制培养基。在该培养基上，能分解油脂的微生物可以正常生长，其他微生物不能正常繁殖。

（3）可利用血球计数板计数法测定菌液中的微生物数量，计数时，活菌和死亡的细菌都会被计数，所以测定培养液中的活菌数应采用稀释涂布平板法。

（4）在45℃时，降解10g油脂所需酶的数量最大，则该温度下酶活性最低；由题干可知，40℃时分解10g油脂所需的酶的数量最少。应在40℃左右范围内设置不同温度梯度来探究酶的最适活性。

高考阅卷参考答案：

（1）苏丹III（或者苏丹IV） 萃取法

（2）油脂

（3）血细胞计数板 稀释涂布平板

（4）45 40

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3．【2016年湖南高考真题39.生物——选修1 生物技术实践】（15分）

空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：

①配制培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）; ②制作无菌平板； ③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作； ④将各组平板置于37 ℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

回答下列问题: （1）该培养基中微生物所需的氮来源于_________________。若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是_________________。

（2）步骤③中，实验组的操作是_________________。

（3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_________________现象。若将30（即36－6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法_______________（填“正确”或“不正确”）。

解析：

（1）牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白质的水解产物，都可以作为氮源；平板为固体培养基，故需要加入琼脂。 （2）实验探究的是教室内不同高度空气中微生物的分布，其中变量为不同高度，故需在不同高度下放置开盖平板．同时，为了保证单一变量，需要保证开盖放置时间一致；为了保证实验可靠，需要设置多个平行实验。

（3）在完全正确的操作情况下，空白对照组中不应出现菌落，若出现菌落，说明操作过程中存在微生物污染，属于实验失误，所有实验数据均不应采用。

高考阅卷参考答案：

（1）牛肉膏、蛋白胨 琼脂

（2）将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间

（3）污染 不正确

4．【2017年湖南高考真题39.生物——选修1 生物技术实践】（15分）

某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：

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（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生____________________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是_______________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是________________________（答出两点即可）。

（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择____________________（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是________________________。

（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2

HPO4，其作用有_______________（答出两点即可）。

解析：

（1）尿素分解菌能分解尿素是因为能产生脲酶。尿素分解菌是异养生物无法固定CO2。葡萄糖在细菌细胞中可以作为能源氧化分解提供能量，还可以转化为氨基酸等非糖物质。

（2）筛选尿素分解菌应该以尿素为唯一氮源，否则其它杂菌也能在培养基中生长，从而无法起到筛选作用。

（3）KH2PO4和Na2HPO4可提供无机盐，也可以维持培养基的pH。

高考阅卷参考答案：

（1）脲酶

分解尿素的细菌是异养型生物，不能利用CO2来合成有机物

为细胞生物生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料

（2）尿素

其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用

（3）为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定

5．【2018年湖南高考真题37.生物——选修1 生物技术实践】（15分）

将马铃薯去皮切块,加水煮沸一定时间,过滤得到马铃薯浸出液,在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂,用水定容后灭菌,得到M培养基。

回答下列问题: （1）M培养基若用于真菌的筛选,则培养基中应加入链霉素以抑制__________的生长,加入了链霉素的培养基属于________培养基。

（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有__________________________________(答出两点即可),氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有__________________________________(答出两点即可)。

（3）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖,接种土壤滤液并培养。平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是________________。该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是__ ____________________。

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（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量,在同一稀释倍数下得到以下结果: 甲同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是110、140和149,取平均值133。

乙同学涂布了3个平板,统计的菌落数分别是27、169和176,取平均值124。

有人认为这两位同学的结果中,乙同学的结果可信度低,其原因是_________。

【解析】本题考查物质的合成、淀粉的鉴定及微生物的培养和计数。

(1)链霉素属于抗生素,作用是抑制细菌的生长。可以通过加入链霉素筛选出抗链霉素的细菌,属于选择培养基。

(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质,营养物质类型除氮源外还有碳源、无机盐、有机盐、生长因子等,氮源进入细胞后,可参与合成的生物大分子有蛋白质、核酸。

(3)淀粉遇碘变蓝,所以应加入的显色剂是碘液。该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是淀粉遇碘液显蓝色,产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解,形成透明圈。

(4)正确稀释涂布平板,平板上的菌落数应为30~300。而乙同学的结果中,1个平板的计数结果与另2个相差悬殊,结果的重复性差。

答案:(1)细菌

选择

(2)碳源、无机盐

蛋白质、核酸

(3)碘液

淀粉遇碘液显蓝色,产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解,形成透明圈 (4)乙同学的结果中,1个平板的计数结果与另2个相差悬殊,结果的重复性差

[最新考纲] 生物技术实践

实验

5-1 微生物的利用

（1）微生物的分离和培养

（2）某种微生物数量的测定

（3）培养基对微生物的选择作用

（4）利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用

5-3生物技术在食品加工及其他方面的应用

要求

掌握程度参考考试大纲中的：

Ⅰ．考核目标与要求

2．实验与探究能力

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（1）从生物材料中提取某些特定的成分

（2）运用发酵加工食品的基本方法

掌握程度参考考试大纲中的：

Ⅰ．考核目标与要求

2．实验与探究能力

考纲解读：

本专题是实验内容，主要包括微生物的利用、酶的应用（蛋白酶、脂肪酶、脲酶、纤维素分解复合酶）和生物技术在食品加工及其他方面（植物芳香油的提取、胡萝卜素的提取）的应用等。从近年的高考情况看，高考命题时往往从实验细节入手，比较注重对实验基本操作方法的考查。

命题规律：

1．从考查内容上看，主要考查微生物的纯化培养操作与应用、传统发酵技术。

2．从考查角度上看，联系生产生活实际考查微生物的计数、分离和纯化培养：结合发酵食品制作过程考查传统发酵技术原理及基本操作。

命题趋势：

预计2018年高考，命题热点有：以发酵食品加工为背景考查微生物的分离、纯化和培养过程以及在食品加工中所起的作用；植物有效成分的提取；以环境污染（如某种有害物质的存在及量的多少）为背景考查微生物的生存条件和培养以及生物技术在其他方面的应用。特别是微生物的利用，考查概率较高。复习时要注意试题的综合性。

考点预测：

（1）（常考点）生物技术在食品加工中的应用（腐乳的制作）。

（2）（常考点）微生物的培养和应用（微生物的实验室培养）。

（3）（常考点）生物技术在其他方面的应用（植物芳香油的提取、胡萝卜素的提取）。

能力预测

（1）以发酵食品加工为背景考查对几种食品加工技术的原理、操作注意事项的理解能力；

（2）以某种微生物的培养或分离为实例考查微生物操作技术的掌握情况，以及运用生物技术解决某种实际问题的能力；

（3）以某种生物技术流程图（玫瑰油、橘皮油、胡萝卜素提取的流程图）考查获取信息能力。

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三、典例精析【研究2018年非湖南高考真题，寻找全国命题规律，探索二轮复习方法】

1.(2018·全国卷Ⅱ·T37)[生物——选修1:生物技术实践] 在生产、生活和科研实践中,经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。

回答下列问题: (1)在实验室中,玻璃和金属材质的实验器具__________(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。

(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法,与煮沸消毒法相比,这两种方法的优点是____________________________________________________。

(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒,其原因是紫外线能__________。在照射前,适量喷洒____________________________,可强化消毒效果。

(4)水厂供应的自来水通常是经过__________________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。

(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,而锅内并没有达到相应温度,最可能的原因是__________________________________________。

【解析】(1)玻璃和金属材质的实验器具可以通过干热灭菌的方法来灭菌。

(2)巴氏消毒法是在70～75 ℃煮30 min或在80 ℃下煮15 min,可以杀死牛奶中的微生物,并使牛奶的营养成分不被破坏;高温瞬时消毒是在较短的时间内利用高温杀死微生物,由于时间较短,营养物质损失较少。

(3)紫外线有消毒、灭菌的作用,在照射前,适量喷洒消毒液,可以强化消毒效果。

(4)自来水消毒通常采用“氯气”或“紫外线”等方法。

(5)使用高压蒸汽灭菌锅时,若压力达到设定要求,但没有达到相应温度,最可能的原因是锅内冷空气没有排尽。

答案:(1)可以

(2)在达到消毒目的的同时,营养物质损失较少

(3)破坏DNA结构

消毒液

(4)氯气

(5)未将锅内冷空气排尽

2.(2018·全国卷Ⅲ·T37)回答下列与酵母菌有关的问题: （1）分离培养酵母菌通常使用__________(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”)培养基,该培养基应采用__________灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上,培养一段时间后可观察到菌落,菌落的含义是____________。

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（2）酵母菌液体培养时,若通入氧气,可促进________(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”);若进行厌氧培养,可促进________(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)。

（3）制作面包时,为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌,酵母菌引起面包松软的原因是____________________________________。

【解析】（1）麦芽汁琼脂培养基含糖量高,更适合酵母菌培养;该培养基应采用高压蒸汽灭菌法灭菌;若将酵母菌划线接种在平板上,培养一段时间后可观察到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。

（2）酵母菌液体培养时,若通入氧气,进行有氧呼吸产生H2O和CO2,释放能量多,菌体增殖快;若进行厌氧培养,进行无氧呼吸,产生乙醇和CO2,释放能量少,菌体增殖慢。

（3）制作面包时,在面粉中添加一定量的酵母菌,因酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖,产生CO2,CO2是气体,遇热膨胀而形成小孔,使得面包松软多孔。

答案:（1）麦芽汁琼脂

高压蒸汽

由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体

（2）菌体快速增殖

乙醇产生

（3）酵母菌分解葡萄糖会产生CO2,CO2使面包松软

3.

(2018·江苏高考·T31)酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半,可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养,这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母,并进行大量培养。如图所示为操作流程,请回答下列问题:

（1）配制培养基时,按照培养基配方准确称量各组分,将其溶解、定容后,调节培养基的________,及时对培养基进行分装,并进行________灭菌。

（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中,在步骤③中将温度约________(在25 ℃、50 ℃或80 ℃中选择)的培养基倒入培养皿混匀,冷凝后倒置培养。

（3）挑取分离平板中长出的单菌落,按步骤④所示进行划线。下列叙述合理的有________。

a.为保证无菌操作,接种针、接种环使用前都必须灭菌

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b.划线时应避免划破培养基表面,以免不能形成正常菌落

c.挑取菌落时,应挑取多个菌落,分别测定酵母细胞中甲醇的含量

d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度,获得甲醇高耐受株

（4）步骤⑤中,为使酵母数量迅速增加,培养过程中需保证充足的营养和________供应。为监测酵母的活细胞密度,将发酵液稀释1 000倍后,经等体积台盼蓝染液染色,用25×16型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数,理论上________色细胞的个数应不少于____________,9才能达到每毫升3×10个活细胞的预期密度。

【解析】（1）不同种微生物生长所需的最适pH不同,所以,配制培养基时,溶化后需调pH。分装到试管中的培养基需进行高压蒸汽灭菌。

（2）倒平板时,锥形瓶中的培养基温度控制在50 ℃左右较适宜,温度太低会凝固,太高会烫手。

（3）挑取分离平板中长出的单菌落用于平板划线时需注意题干中a、b、d所叙述的要点,为了获得专一酵母,只挑取效果最好的菌落就行,不需挑取多个菌落。

（4）酵母在有氧条件下繁殖快,所以除了营养物质外,还需提供充足的氧气。对于死酵母通常用台盼蓝进行染色,活酵母不会被染色。设5个中格中应有m个,据题意可得到等式:m×5439×10×10=3×10,m=60个。但由于用等体积的台盼蓝染液进行了染色,也被染液稀释了一倍,所以无色酵母数应不低于30个。

答案:（1）pH 高压蒸汽(湿热) （2）50 ℃ （3）a、b、d (4)氧气

无

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考点一

传统发酵技术的应用

①无氧呼吸

②C6H12O6―→2C2H5OH＋2CO2

③冲洗

④果酒

⑤果醋

⑥脂肪酸、甘油

⑦加盐腌制

⑧无氧呼吸

⑨N－1－萘基乙二胺盐酸盐

⑩加入调味料

○11配制盐水

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1、区分“4”种传统发酵食品的生产技术

食品

果酒

果醋

腐乳

泡菜

菌种及代谢类型

醋酸菌、异养需氧型

毛霉等、异养需氧型

乳酸菌、异养需氧型

制作原理

醋酸菌将糖(酒精)氧化成醋酸

蛋白酶、脂肪酶水解蛋白质、脂肪

乳酸菌无氧呼吸产生乳酸

适温范围

18~25 ℃

30~35 ℃

15~18 ℃

18~20 ℃

酵母菌、异养兼性厌氧型

酵母菌无氧呼吸产生酒精

2、辨一辨查疑难

1.果酒发酵中期通入氮气，酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼吸。

（√ ）

2.果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关。（√ ）

3.用葡萄制作果醋时,若先通入空气再密封发酵可以增加醋酸含量提高品质。（

×

）

4.腐乳制作过程中，控制发酵温度的主要目的是腐乳调味。（×

）

5.腐乳制作后期加入香辛料和料酒有防腐作用。（√ ）

6.毛霉的主要作用是分解脂肪和淀粉。（× ）

7.成品腐乳表面的粘性物质主要由细菌产生。（×

）

8.腐乳坯若被细菌污染,则腐乳坯表面会出现黏性物。（√ ）

9.勤向腐乳坯表面喷水,有利于毛霉菌丝的生长。（×

）

10.腐乳的制作装坛阶段加入料酒,可有效防止杂菌污染。（√ ）

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考点二 微生物的培养与应用

①液体培养基

②碳源

③氮源

④巴氏消毒

⑤干热灭菌法

⑥称量

⑦倒平板

⑧1葡萄糖苷

12梯度稀释

13刚果红

平板划线

⑨稀释涂布平板

⑩样品的稀释

1○○○1．理清微生物的培养的基本技术

(1)培养基的制备:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。

(2)无菌技术

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①消毒:煮沸消毒法、巴氏消毒法以及使用化学试剂进行消毒。

②灭菌:对培养基进行灭菌,常采取高压蒸汽灭菌;对接种环灭菌采取灼烧灭菌;对玻璃器皿灭菌采取干热灭菌。

(3)微生物的纯化技术

①平板划线法: 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

②稀释涂布平板法: 将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将其分别涂布到琼脂固体培养基的表面,在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而在培养基表面形成单个菌落。

(4)倒平板操作:待培养基冷却至50 ℃左右时,在酒精灯火焰附近倒平板。

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考点三 植物有效成分的提取

（1）玫瑰精油的提取：

（2）橘皮精油的提取：

（3）胡萝卜素的提取：

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Ⅰ、填写有关果酒、果醋的制作的问题。

（1）纤维素在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度，这是因为酶 。在酒精发酵阶段，需添加酵母菌。在操作过程中，发酵罐先通气，后密闭。通气能提高酵母菌的数量，有利于密闭时获得更多的 （填产物）。

（2）苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的。

①②葡萄糖――→丙酮酸――→乙醇＋CO2

过程①和②是苹果醋生产的第一阶段，在 细胞的细胞质基质中进行，其产物乙醇与 的重铬酸钾反应呈现 ，这一反应可用于乙醇的检验。

（3）传统发酵技术应用十分广泛，果酒和果醋就是常见例子。当发酵装置由果酒酿造转为果醋酿造时，首先要提高 ，其次要注意通入 。

（4）在果酒酿造过程中，如果果汁灭菌不严格，含有醋酸菌，在酒精发酵旺盛时，醋酸菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？

(“能”或“不能”)。请说明理由： 。

（5）果酒的制作过程中，在葡萄汁装入消毒发酵瓶时，要预留大约 的空间。所使用的发酵液能使酵母菌生长繁殖而绝大多数其他微生物无法适应，这种发酵液应具有 的特点。

（6）在果汁加工过程中可添加 酶提高出汁率和澄清度。

（7）在制葡萄酒的过程中，在不同时间内对发酵液样品进行检测，发现发酵液的pH一直下降，原因是 。

（8）果酒发酵中期通入氮气，酵母菌将从 转变为 ，果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关。

（9）用带盖的广口瓶制果酒，每隔12小时左右 一次，以放出二氧化碳。此后再将瓶口拧紧。

（10）用带盖的广口瓶制果酒，当发酵产生酒精后，再将 打开，盖上 ，进行葡萄醋的发酵。

（11）冷至室温的煮熟的糯米饭与甜酒曲混匀装之于透明的玻璃瓶中，瓶内预留了1/3的空间，加盖密封，置于18～25℃的环境中，在发酵进程中先来水，后来酒，这说明酵母菌的代谢类型是 。

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答案：

（1）在最适温度条件下催化能力最强 酒精 （2）

酵母菌 硫酸酸化 灰绿色 （3）

发酵温度

无菌空气 （4）

不能 醋酸菌是好氧细菌，而果酒发酵为无氧环境，醋酸菌无法生存 （5） 1/3 缺氧、呈酸性 （6）

纤维素酶和果胶(单答果胶酶给分，单答纤维素不得分) （7）

酵母菌呼吸作用产生的二氧化碳使发酵液pH值下降。

（8）

有氧呼吸 无氧呼吸 （9）

拧松瓶盖 （10）瓶盖 一层纱布 （11）异养兼性厌氧性型

Ⅱ、填写有关腐乳制作、泡菜制作的问题。

（1）腐乳制作过程中，控制发酵温度的主要目的是有利于 等微生物的生长。

（2）腐乳制作后期加入香辛料和料酒均有 作用和调味功能。

（3）毛霉等微生物所产生的 和 分别将蛋白质和脂肪水解成分子较小的有机物。

（4）成品腐乳表面的粘性物质主要由 菌产生。

（5）腐乳外部有一层致密无害的皮是 形成的。

（6）用于制作腐乳的豆腐的含水量为 %；卤汤中的料酒一般控制在 %左右。

（7）加盐腌制豆腐与盐的比例大约为5:1，泡菜盐水中盐与水的比例为 。

（8） 常用于生产酸奶，该菌的代谢类型为 。

（9）泡菜坛内有时会长一层白膜，该膜是 繁殖所致。

（10）制作果酒果醋的发酵瓶清洗干净后，用体积分数为 消毒；用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用 消毒。

（11）腐乳是我国古代劳动人民创造出的一种经过微生物发酵的大豆食品。现代科学研究表明，许多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。腐第

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乳制作过程中加盐的作用是 。

（12）成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少，主要原因是发酵后期营养物质消耗等环境因素的变化，加剧了不同种类乳酸菌的 ，淘汰了部分乳酸菌种类。

答案：

（1）

毛霉 （2）

防腐 （3）

蛋白酶 脂肪酶 （4）

真 （5）

毛霉的匍匐菌丝 （6） 70 12 （7） 1:4 （8）乳酸杆菌 异养厌氧型 （9）

产膜酵母菌 （10） 70%的酒精

沸水 （11）析出豆腐中的水分，使其变硬和抑制其他微生物生长，避免豆腐块腐败变质。

（12）种间竞争(或竞争) Ⅲ、填写有关微生物培养、分离与应用的问题。

（1）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:

①酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有_____________。

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②将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_____________。以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_____________，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_____________。

③下图为连续划线法示意图，在图中_____________ （填图中序号）区域更易获得单菌落。

④上图接种该平板要取 环菌种，接种环在酒精灯 焰灼烧 次。

（2）从土壤中筛选产脲酶细菌的过程中，选择培养基应以 为唯一氮源；鉴别培养基还需添加 作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其 周围的指示剂将变成红色。

（3）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10的土壤样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是 ，每克土壤样品中的细菌数量为 个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较实际的 。

（4）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生 。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是 ，但可用葡萄糖作为碳源，进入尿素分解菌体内的葡萄糖的主要作用是 。（答出两点即可）。

（5）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择 （填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是 。

（6）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2 HPO4，其作用有 （答出两点即可）。

（7）分离纯化乳酸菌时，首先需要用 对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是 。

（8）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有 和 。分离纯化时应挑选出 的菌落作为候选菌。

（9）实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是 和 ；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该 。为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是 。为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，第

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5

结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是 。

（10）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是 。向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是 。

（11）在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与纤维素形成红色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的 。

（12）某小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是 ；某小组采用平板划线法分离水样中的细菌，操作时，接种环通过 灭菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是 。

（13）微生物培养基通常在压力为100 kPa，温度为 ℃条件下，灭菌15至30 min，然后待培养基冷却至 ℃时，在 倒平板。

（14）在筛选纤维素分解菌的过程中，常用的方法是 。但这只是分离纯化的第一步，为了确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行 的实验。

（15）为了获得能降解氯苯的微生物菌种，可在被氯苯污染的土壤中取样，并应选用

以 为碳源的培养液进行选择培养。除含有碳源外，培养液还应含有 、无机盐和蒸馏水等。若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可用 直接计数，也可选用 法统计活菌数目，一般前者得到的结果 (填“>”、“＝”或“<”)后者。

（16）培养基的类型很多，但培养基中一般都含有水、碳源氮源、生长因子和 。分离纯化微生物最常使用的接种方法是 和 两种。在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是 。可以通过 来判断细菌是否分解尿素。土壤中的细菌之所以能够分解尿素，是因为它们能合成 。对分离得到的土壤细菌如果转移放入大试管进一步培养，则土壤细菌的增长呈现 型曲线增长。

（17）某同学在培养过程中发现培养基上感染了几种细菌。如果在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 指示剂培养几种菌后，指示剂变红就可以鉴定其中含有能够分解尿素的细菌，该培养基中的尿素的作用是为所筛选的目的菌株提供 和 ；若在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入 染料，培养几种菌后，培养基中出现透明圈，就可以鉴定其中含有 。

（18）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从 环境采集；若要筛选能产生耐高温的DNA聚合酶的水生细菌应从 中寻找。

（19）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择

的培养基，并在 条件下培养。 第

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（20）从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。接种前要对培养基进行 处理。在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在 条件下进行。

（21）在生物的培养中，一般要对配制的培养基采用高压灭菌，其中“高压”是

为了 。

（22）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的 可将纤维素分解成纤维二糖。

（23）乳酸菌是一种原核生物，其发酵过程会以胆固醇作为 。取适量发酵的酸肉，剪碎、研磨然后加入无菌水稀释，目的是 。对乳酸菌的 进行的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。刚刚制作好的平板培养基需冷却后并倒立放置，

目的是 。

答案：

（1）①蛋白胨、苯酚 ②增加

稀释涂布

（2）尿素 酚红

菌落 红

（3）稀释涂布平板法

1.75×10 少 （4）

脲酶 分解尿素的细菌是异养型生物，不能利用CO2来合成有机物 为细胞生物生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料

。

（5）

尿素 其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用。

（6）

为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定 （7）

无菌水 泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落。

（8）

鉴别乳酸菌 中和产生的乳酸 具有透明圈 （9）

干热灭菌 高压蒸汽灭菌 用牛皮纸(报纸)包扎器皿

抑制细菌(放线菌)生长。 接种环温度过高，菌被杀死。

（10）培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果 避免培养基污染棉塞。

（11）

透明圈。

8凝固剂 ③

③ ④ 1 外 4 第

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（12）

检测培养基平板灭菌是否合格

灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落

（13） 121 50 酒精灯火焰附近 （14）

刚果红染色法 发酵产纤维素酶 （15）

氯苯 氮源

显微镜 稀释涂布平板 > （16）

无机盐 平板划线法 稀释涂布平板法

灼烧灭菌

检测培养基pH的变化

脲酶 S （17）

酚红

氮源 选择目的菌株

刚果红

纤维素分解菌。

（18）

海滩等高盐

热泉生态系统 （19）

以淀粉为唯一碳源 高温 （20）

高压蒸汽灭菌 无菌 （21）

杀死培养基中的细菌芽孢。

（22） C1酶、CX酶 （23）

碳源 获得菌种 选择培养基 避免冷凝水进入培养基造成污染。

Ⅳ、填写有关植物有效成分的提取的问题。

（1）加速水蒸气所携带出来的玫瑰油水混合物分层的物质是 ，加速橘皮油水混合物分层的物质是 。

（2）β—胡萝卜素是含有多个双键的烯烃，1分子β—胡萝卜素在人或动物的小肠、肝脏等器官被氧化成两分子 。

（3）素炒胡萝卜时，菜中橘黄色浮油是 溶解在 中所致。

（4）野生油茶籽采用机械 可得到上等级的茶籽油和茶枯饼，因茶枯饼还含有一定茶籽油，然后以茶枯饼为原料通过 法还能提取一定量的茶籽油。

（5）分离菠菜叶绿体中的色素的方法是 法；将用萃取法提取的胡萝卜素粗品进行鉴定采用 法，通常用 点样。

（6）植物芳香油主要包括 ，橘皮油主要成分为 。

（7）玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸汽 。

（8）玫瑰精油是制作 的主要成分，能使人产生 。

（9）用于提炼玫瑰精油的玫瑰花要在花开的 采收。

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（10）提取玫瑰精油所采用的水蒸气蒸馏法的蒸馏瓶可 ，萃取胡萝卜素的萃取装置应 加热，这些装置都要附加 设施。

（11）萃取胡萝卜素的温度太高，干燥时间太长会导致 。

（12）鉴定所提取的胡萝卜素粗品时，点样要 ，注意保持 。

答案：

（1）

氯化钠 0.25%NaHCO3和5%Na2SO4 （2）

维生素A （3）

胡萝卜素 食用油 （4）

压榨法 萃取 （5）

纸层析 纸层析

最细的注射器针头 （6）

萜类化合物及其衍生物

柠檬烯 （7）

一同蒸馏 （8）

高级香水

愉悦感 （9）

盛期 （10）

明火加热 水浴

冷凝

。

（11）

胡萝卜素分解 （12）

快速细致

滤纸干燥。

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专题强化练

1．下列图1为果酒果醋制作概念图，图2、图3为实验装置图，回答下列问题。

（1）若用装置图3制作果酒果醋，a为充气口其作用在制作果醋时通入 ，在制作果酒时 ；b为排气管，在制作果酒时排出 ，该排气管细长而弯曲的原因是 ；c为出料口，其作用是 。装置中的发酵液只占空间的2/3，预留了1/3的空间的原因是在发酵早期 ，同时防止 。

（2）若用装置图2制作果酒、果醋，制作果酒时阀门 关闭，制作果醋时阀门 打开。

（3）图1中冲洗葡萄的原因是 ，但不能反复冲洗，以防菌种流失；冲洗和去枝梗的顺序是 。

（4）用红葡萄制作果酒，红葡萄为酵母菌提供 等营养。葡萄酒呈红色的原因是 ，其根本原因是 。

（5）有的葡萄酒有酸菜味的原因是发酵液中混杂了 ，将酒瓶打开，不久酒变酸了，液体表面有一层菌膜，该菌膜主要是 繁殖的结果。

（6）装置2中，装入葡萄汁后同时将阀门a、b打开，既 都充足，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成 ；葡萄酒制成后打开阀门a，既缺少糖源，但氧气充足，醋酸菌将 变成 ，再将 变为 。

（7）在制葡萄酒的过程中，若将温度控制在 ℃，时间在 d，从 取出发酵液可使 变成灰绿色。

（8）在制葡萄醋的过程中，若将温度控制在 ℃，时间在 d，从 取出发酵液会品尝到 味。

（9）传统的发酵要防止发酵液被污染，其中发酵装置清洗干净后用70%的酒精消毒。酒精发酵旺盛时， 导致醋酸菌生命活动受到抑制。

（10）制作果酒的菌种来自 ；

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制作果醋的菌种来 ，醋酸菌种也可以到当地生产食醋的工厂或 购买。

答案：

（1）无菌空气 关闭 酵母菌所产生的二氧化碳

防止空气中的微生物进入而污染发酵液

用来取样检测发酵产物等，以了解发酵进程 促进酵母菌快速繁殖 发酵液从排气管溢出 （2） a、b a、b （3）

冲洗去葡萄表面的浮尘 先冲洗再去枝梗。

（4）

水、无机盐、碳源和氮源 葡萄皮上的色素溶解在发酵液中 葡萄皮上的色素溶解在发酵液的酒精中。

（5）

乳酸菌 醋酸菌 （6）

糖源和氧气 醋酸 乙醇 乙醛 乙醛 乙酸 （7） 18～25 10～12 出料口 硫酸酸化的重铬酸钾 （8） 30～35 7～8 出料口 浓烈的醋 （9）

因温度较低而且缺氧 （10）附在葡萄皮上野生型酵母菌 自环境（空气）中野生醋酸菌 菌种保藏中心 2．下图为腐乳制作的流程示意图，请据图分析回答下列问题：

让豆腐长出毛霉

加盐腌制

加卤汤装瓶

密封腌制

（1）传统的制作过程中，豆腐块上生长的毛霉，其菌种来自 。而现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的菌种接种在豆腐上，这样可以避免其他菌种的污染，保证产品的质量。

（2）腐乳制作的原理主要利用了毛霉等微生物产生的 ，通过发酵使豆腐中营养物质的种类增加，且更易于消化和吸收。

（3）用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要 。加入卤汤后，要用胶条密封，密封时最好将瓶口通过酒精灯火焰，防止 。

（4）配置卤汤所加的香辛料的作用是调制腐乳的风味和防腐杀菌；若你完成了腐乳制作，可以从 等方面评价腐乳的质量。

（5）吃腐乳时往往会发现有一层无毒致密的“皮”，该“皮”是由 形成的。

（6）腐乳含嘌呤量普遍较高，痛风、肾病患者及消化道溃疡患者，宜少吃或不吃，以免加重病情；腐乳中的嘌呤产生可能来自物质 的代谢产物。

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（7）影响腐乳的品质（味）的因素较多：

①豆腐块是毛霉生长繁殖的固体培养基，含水量最好控制在 。

②毛霉生长的适温为 ，该温度下其他微生物生长发育受到抑制。

③豆腐研制过程中抑制微生物生长，防止腐败变质的物质有 。

④影响腐乳的品质（味）的因素除了豆腐的含水量、发酵温度、盐用量、料酒、香辛料外还有 等。

答案：

（1）空气中的毛霉孢子 （2）蛋白酶、脂肪酶等酶类 （3）用沸水消毒 瓶口被污染 （4）色泽、口味、块形（3分） （5）毛霉的匍匐菌丝 （6）核酸

（7）①70%②15～18℃③盐、酒、香辛料④发酵时间

3．某研究性学习小组制作泡菜、检测亚硝酸盐含量和计数乳酸菌的数量。

（1）永州泡菜鲜美可口，而且开胃、增加食欲，泡菜开胃增加食欲的原因是泡菜中含有促进开胃增加食欲的物质是 。

（2）取泡菜的汤汁制作临时装片在显微镜下观察，制作泡菜选用的菌种是下图的 所示的生物。

（3）尽管泡菜鲜美可口但不能多吃，还是多吃新鲜的蔬菜为佳，因为新鲜蔬菜的亚硝酸盐含量比泡菜 。

（4）泡菜坛内有时会长一层白膜该白膜是 所致；酒瓶敞开就变酸，液体表面的菌膜是 所致。

（5）用稀释涂布平板法测定每克泡菜原汁的乳酸菌的含量，泡菜原汁取样于同一时间同一坛泡357菜，分别在10、10、10三种稀释倍数下，各种稀释倍数下均涂布了四个平板，每个平板均接种0.1mL稀释菌液，在无氧、适温条件下培养的实验结果如下表：

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稀释10

倍

平板（A）中的菌落数

A1

A2

A2

A4

350 3稀释10倍

平板（B）中的菌落数

B1

B2

B3

B4

5稀释10

倍

平板（C）中的菌落数

C1

C2

33 C3

39 C4

19 7341 303 283 308 245 251 284 21 根据上表数据计算，每克泡菜原汁中乳酸菌数目大约为 个。

（6）最近湘雅医院抢救了一例亚硝酸盐中毒患者，据苏教授说亚硝酸盐具有强氧化性，可将正常的二价铁氧化成三价铁，使患者的 变性失活，出现缺氧症状。

（7）在人体消化道的微生物作用下，亚硝酸盐可转化成具有致癌作用的 。

（8）泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有 、 和 等。

（9）牛奶制成酸奶能量含量降低、有机物总质量下降、有机物种类增多、营养有所提高，该过程主要参与的微生物菌种是 。

（10）请制作一个表格，表示某科研小组检测三坛泡菜（1号坛萝卜泡菜、2号坛芥菜泡菜、3号坛甘蓝泡菜）腌制过程中亚硝酸盐含量变化（mg/kg）

（11）制作泡菜宜选用新鲜的蔬菜或其他原料，原因是 。

（12）制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入乳酸菌。取少量酸奶，用无菌蒸馏水稀释后，再用________蘸取少量的稀释液，在MRS 乳酸菌专用培养基的平板上划线，以获得乳酸菌单菌落。下图所示的划线分离操作，正确的是________。接种该平板取 环菌种，接种环灼烧了 次。

答案：

（1）乳酸 （2）D （3）低 （4）产膜酵母的繁殖 醋酸菌繁殖

（5）2.6×10个

（6）血红蛋白 （7）亚硝胺（8）温度 腌制时间 食盐用量

（9）乳酸杆菌

（10）泡菜腌制过程过程中亚硝酸盐含量变化（mg/kg）

腌制天数

1号坛（萝卜泡菜）

2号坛（芥菜泡菜）

3号坛（甘蓝泡菜）

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……

（11）亚硝酸盐的含量低

（12）接种环 B 1 5

4．回答下列有关生物技术实践的问题

（1）用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记 上。 （2）为了防止污染，接种环经火焰灼烧灭菌，然后将 的接种环在酒精灯火焰旁挑取菌落。

（3）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的 酶，其中的 可将纤维二糖分解成葡萄糖。

（4）微生物如尿素分解菌能合成催化尿素分解的酶是 。

（5）高压灭菌加热结束时，切断热源，让灭菌锅 ，当压力表降到零时，打开放气阀防松螺栓，开启锅盖。

（6）倒平板时，应将皿盖打开 的缝隙，倒入培养基立即盖上培养皿盖。

（7）培养硝化细菌的氮源、能源、碳源分别是 。

（8）在 培养基上分离细菌可获得一个细菌菌株形成的单菌落。

（9）培养基分装到培养皿（倒平板）的适温为 ，平板冷凝后要将平板 。接种后的平板 放入恒温培养箱中培养。

（10）菌液系列梯度稀释时，用 的移液管取前一试管中菌液1mL，注入盛有9mL无菌水的后一试管中，使菌液与无菌水混匀，后一试管中的菌液就稀释 倍；操作应在酒精灯火焰旁进行。

（11）琼脂作为固体培养基的 ，在制备培养基的琼脂溶化过程中，不断用玻棒搅拌，防止 。

（12）塞上棉塞的试管、锥形瓶、培养皿、吸管等 ，放入 箱内采用 灭菌。

（13）LB培养基可用于培养大肠杆菌，伊红美蓝培养基可用于 。大肠杆菌在该培养基上形成 菌落。

（14）与分离纤维素分解菌操作步骤相比，分离尿素分解菌操作过程往往没有“选择培养”步骤，因为土样中的 。

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（15）微生物的培养所实施的无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，无菌技术还能有效避免 。

（16）无菌技术的操作主要包括 和 。还包括实验操作应在 进行，实验操作时应避免 与周围的物品 。除了前面方法外，实验室还用 进行消毒。

（17）制作泡菜的培养基是新鲜的蔬菜，参与发酵的菌种所需要的营养物质除了水、无机盐、碳源、氮源，还需要原料中的 （特殊营养物质或生长因子）。

答案：

（1）

皿底 （2）

冷却 （3）

复合 葡萄糖苷酶 （4）

脲酶 （5）温度自然下降 （6）

一条稍大于瓶口 （7）

氨、氨、空气中的二氧化碳、。

（8）

固体 （9） 50℃

倒置 倒置 （10）

灭菌 10 （11）

凝固剂

琼脂糊低而导致烧杯破裂。

（12）

玻璃仪器

干热灭菌 干热 （13）

检测水中大肠杆菌的含量

深紫色（黑色） （14）

尿素分解菌数量较多 （15）

操作者自身被微生物感染 （16）

消毒

灭菌 酒精灯火焰附近

已经灭菌处理的材料用具

相接触

紫外线或化学药剂 （17）

维生素

5．回答下列有关植物有效成分的提取问题。

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流程图1：鲜玫瑰花+清水→水蒸气蒸馏→油水混合物→分离油层→除水→玫瑰油。

流程图2：新鲜的橘皮干燥→石灰水浸泡→漂洗→压榨→静置→再次过滤→橘皮油。

流程图3：胡萝卜→粉碎→干燥→萃取→过滤→浓缩→胡萝卜素。

上面三个流程图分别是玫瑰精油、橘皮精油和胡萝卜素的提取流程图，回答相关问题。

（1）流程图1的“油水混合物→分离油层”过程需要加入试剂是 ；流程图2的“萃取→过滤”过程需要加入试剂是 ，两者的作用都是 。分离油层所用的仪器是 。

（2）流程图1的“除水→玫瑰油”过程需要操作是过滤、流程图2的两次过滤、流程图3的过滤的作用是 。

（3）流程图2过程中得到压榨液后，先用普通布袋过滤除去固体物和残渣，然后 进一步除去质量较小的残留固体物，再用分液漏斗或吸管将 分离出来。此时，橘皮油中含有少量的水和果蜡，需在5～10 ℃下静置5～7天， ，用吸管吸出上层的橘皮精油，其余部分过滤， 合并，成为最终的橘皮精油。

（4）玫瑰精油提取的水蒸气蒸馏装置应选择下图装置 ，在该蒸馏瓶中加入碎瓷片以 ，锥形烧杯中的液体为 。胡萝卜素提取的萃取装置为下图的装置2，需要水浴加热；萃取液的浓缩装置为装置 ，最终橘黄色固体胡萝卜素粉末分布在该装置的 内，锥形烧瓶内的液体是 。

（5）某同学在鉴定胡萝卜素时，所做的纸层析实验如左下图所示，请指出该同学的操作有3处错误：① ② ③ 。

（6）根据上图两张胡萝卜素的纸层析结果示意图回答下列问题。

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①在A、B、C、D四点中， 是标准样品原点， 是提取样品原点。

②图中甲代表的物质是 ，乙代表的物质是 。

③纸层析结果1说明 。

（7）不能用（4）中的装置1提取橘皮精油的原因是 。

答案：

（1）

氯化钠 0.25%NaHCO3和5%Na2SO4 促进油水分离 分液漏斗 （2）将液体物质与固体物质分离 （3）

离心 上层的橘皮油 使杂质沉淀 滤液与析出的上层橘皮油 （4） 1 防止暴沸 油水混合物 2 1 蒸馏烧瓶 萃取剂

（5）

①色谱器未加盖密封②层析液过多，没过了基线③滤纸两边接触

（6）① A和D B和C ②

胡萝卜素 其他色素和杂质③

实验不成功没有提取胡萝卜素。

（7）

蒸馏法导致原料焦糊，有效成分水解

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