课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀说课稿

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、研究思路

（一）筛选菌株

1如何筛选？有利目的菌生存的条件，抑制或阻止非目的菌生存。

2选择培养基？

练习：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（二）统计菌落数目

1稀释涂布平板法统计原理？稀释程度高时，一个菌落由一个细菌形成。

2要选30-300之间的，为什么？稀释程度太低，一个菌落可能来自于多个细菌；稀释程度太高，可能有的培养基上没有菌落。

（三）设置对照

1对照的主要目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

比如：本实验中可设置两种对照，一种是选择培养基不接种，看有没有杂菌的污染，这样就排除了实验组除了接种尿素菌以外的因素，证明实验组的菌落确实是尿素菌形成的；本实验还可以设置牛肉膏蛋白胨培养基上接种，排除了实验组除了氶素的选择作用外其他因素的干扰，证明实验结果确实由尿素的选择作用引起的。

2讨论如何解决A同学的问题

A同学有两种可能性：一种是土壤样品细菌本身就多，一种是培养基受到污染或操作失误。

解决方法有两种：一种方案：需要其他同学用A同学的土壤样品做实验，用自己配的培养在进行，如何结果与A相同，则土样没问题，如果不同，则A同学实验操作有问题，或培养基有问题。另一案：用A同学的培养基做一个对照实验，如何没有杂菌说明培养基没有问题。

二、实验设计

流程：制备选择培养基和牛肉培养基--------土壤取样------梯度稀释---------涂布平板----------恒温箱培养和观察--------选择合适的平板--------统计数目。

学生讨论：为什么选择30-300的平板来统计？为什么选取菌落数稳定时记录作为结果？

练习：1.利用稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的 菌落，来源于样品的稀释液中的 活菌。通过统计平板上的 ，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行统计。统计的菌落数往往比实际数目 ，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般 而不用 来表示。除此之外， 也是测定微生物数量的常用方法。

2、培养与计数：样品的 将直接影响平板上生长的菌落数目，实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落在 之间，适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用 倍的稀释液进行平板培养；测定 的数量，一般选用103、104和105倍稀释；测定 的数量，一般选用102、103和104倍的稀释液。当第一次做这个实验的时候，可以将稀释液的范围 ，如可以将 的稀释液分别涂布到平板上培养。每克样品中的菌落数为C/V×M，C代表 ，V代表 ，M代表 。

三、操作提示：未处理。

四、结果分析与评价：对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 。在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的 增强，pH 。因此在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 ，培养某种细菌后，如果pH ，指示剂将变红，我们就可准确的鉴定 。

将菌液稀释相同的倍数，在牛肉糕蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛肉糕蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到选择作用。

五、课题延伸：

对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 。在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的 增强，pH 。因此在以尿素为唯一氮源的培养基中加入 ，培养某种细菌后，如果pH ，指示剂将变红，我们就可准确的鉴定 。

将菌液稀释相同的倍数，在牛肉糕蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛肉糕蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到选择作用。