课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教学活动设计方案

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、课题目标：

研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定

二、课题重点与难点：

重点：对土样的选取和选择培养基的配制

难点：对分解尿素的细菌的计数

三、教学内容：

细菌分解尿素的原理： 。

1.筛选菌株

（1）实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。

（2）选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 或 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据：根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养 的微生物；培养基中加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

2.统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有 和 。

（2）

统计样品中活菌的数目的原理：当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。

例1：某同学在某浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果，如何改进？

例2：用101、102、103倍稀释液进行涂布培养细菌后，其菌落平均数为2890、271和50,则菌落总数为（ ）A. 2.89*105个/mL B. 2.71*105个/mL C. 6.0*105个/mL D. 3.85*105个/mL 分析：

连在一起时，平板上观察到的只是 。因此统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。

（3） 也是测定微生物数量的常用方法，常用血球计数板，但缺点是不能 。

3.设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的

。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以 的培养基作为空白对照。

4.关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：

（1） 取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。应先 3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。

（2）制备 ：准备牛肉膏蛋白胨培养基和 培养基

将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了 。

（3）微生物的 与观察：

将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102……

依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。

将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 培养基的斜面中，观察能否产生 的颜色反应。（即脲酶阳性）

（4）细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

5. 操作注意事项：

无菌操作：培养用具、培养基、操作过程均灭菌；

培养皿做好时间标记；

缺点：统计的菌落数往往比活菌的

，原因是当

制定好操作计划。

三、结果分析和评价：

1. 确定培养基是否起到选择作用；

2.是否获得30-300稀释度的平板；

3.计数后与其他小组比较，分析差异较大的原因。