复习与测试教学教案设计

血红蛋白的提取练习题

1．蛋白质提取、分离在分子生物学研究中具有重要意义。（1）蛋白质提取和分离的步骤一般分为__________、____________

、纯化和纯度鉴定。

（2）若要从红细胞中提取血红蛋白，则要对获得的红细胞进行洗涤、_________和分离血红蛋白溶液、____________，才能获得含杂质较少的血红蛋白溶液。

（3）分离血红蛋白溶液环节，试管溶液明显分为四层，我们保留其中的第________层（自上而下计算）。溶液特征是__________（颜色等）。

（4）通过__________法将样品进一步纯化，经__________方法（使用最多的）进行纯度鉴定。

大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。

2.回答下列问题：

(1)利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmOl/L的________到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是______________蛋白质。

(2)通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤

膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。

①伊红-美蓝培养基属于_____(填“选择”或“鉴别”)培养基，蛋白胨的作用有_____(答出两点即可）。

②培养大肠杆菌时，在接种前通常需要检测固体培养基是否被污染，检测方法是______。

③用滤膜法进行测定时，滤膜的孔径应

_______(填“大于”或“小于”）大肠杆菌。滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是___。

3.红细胞含有大量的血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的，血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题：

________、________、________和________。

（1）血红蛋白提取和分离的过程可分为四步：（2）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集、血红蛋白溶液。

①加入柠檬酸钠的目的是________________。

②以上所述的过程即是样品处理，它包括________、________收集血红蛋白溶液。

（3）洗涤红细胞的目的是________________________。

（4）你如何知道红细胞已洗涤干净？_______________________________________。

（5）分离红细胞时的离心速度及离心时间分别是_______________________________________。

（6）若离心速度过高和时间过长结果会怎样？_______________________________________。

（7）将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析，即样品的粗分离。

①透析的目的是______________________。

②透析的原理是______________________。

（8）然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。样品纯化的目的是_______________________________________。

4．请分析回答下列有关生物技术实践的问题：(1)在测定亚硝酸盐含量的操作中，取泡菜样液及一系列已知浓度的亚硝酸分别与化学物质发生显色反应，然后通过___________，可以估测出泡菜样液中亚硝酸盐的含量。

(2)在生产高果糖浆的过程中若直接用固定化葡萄糖异构酶处理麦芽糖，能否得到高果糖浆? ___________，原因是_________________________________。

(3)加酶洗衣粉不能用于洗涤丝质及羊毛衣料，其主要原因是___________。

(4)微生物实验中材料或用具需要消毒或灭菌，其中金属工具可选用的灭菌方法有___________和___________。

(5)血红蛋白提取和分离实验中，洗涤好的红细胞在___________和___________的作用下破裂，释放出血红蛋白。

5．请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答下列问题：

（1）将实验流程按先后顺序补充完整：_______________、_______________。

（2）凝胶色谱法的基本原理是根据_______________________分离蛋白质。

（3）洗涤红细胞的目的是去除______________,洗涤干净的标志是_____________________。

为防止血液凝固，在采血容器中通常要预先加入____________（抗凝剂）。

（4）下图是凝胶色谱法分离血红蛋白时样品加入过程的示意图,正确的加样顺序是________。

（5）在装填色谱柱时不能有气泡存在，因为_____________________________________，降低分离效果。如果__________________________，说明色谱柱制作成功。

6.成都七中的生物兴趣小组在寒假以“蛋白质的提取和分离”和“泡菜中亚硝酸盐含量的测定”为课题进行了研究性学习。分析并回答以下问题：

(1)样品处理中红细胞的洗涤要用____反复冲洗、离心。影响红细胞洗涤效果的因素包括___________。

(2)血红蛋白粗分离阶段,透析的目的是_______,若要尽快达到理想的透析效果,可以________(写出一种方法)。

(3)蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳中的迁移率主要取决于__________因素。

(4)装填凝胶色谱柱时,要注意色谱柱内不能有气泡存在,一旦发现气泡必须重装。这是因为______________________________________________。

(5)亚硝酸盐的定量测定可以用_______________法,在制备样品处理液过程中加入氢氧化铝乳液的作用是___________。