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土壤中分解尿素的细菌的分离和计数教学目标1.筛选菌株的原理2.统计菌落数目的方法3.实验流程教学重难点1.筛选菌株的原理2.统计菌落数目的方法3.实验流程教学进程1.筛选菌株的原理在选择培养基的配方中,把尿素作为培养基中的唯一氮源,原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。2.统计菌落数目的方法(1
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正文
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
教学目标
1.筛选菌株的原理
2.统计菌落数目的方法
3.实验流程
教学重难点
1.筛选菌株的原理
2.统计菌落数目的方法
3.实验流程
教学进程
1.筛选菌株的原理
在选择培养基的配方中,把尿素作为培养基中的唯一氮源,原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
2.统计菌落数目的方法
(1)显微镜直接计数法
①原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。计数板是一块特制的载玻片,上面有一个特定的面积为1 mm2和高为0.1 mm的计数室,在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格,每个中格进一步划分为16个(或25个)小格,但计数室都由400个小格组成。
②操作:将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片,再将稀释的样品滴在盖玻片边缘,稍等片刻,待细菌全部沉降到计数室底部再在显微镜下统计4~5个中格中的细菌数,并求出每个小格所含细菌的平均数,再按公式求出每毫升样品中所含的细菌数。
③计算公式:每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数×400×10 000×稀释倍数。
④缺点:不能区分死菌与活菌。
(2)间接计数法(活菌计数法) ①原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作
a.设置重复组,增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释,选择三个稀释度的菌液,分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上,用无菌涂布器将菌液涂布于整个平板表面,放在适宜的温度下培养,计算菌落数。
b.为了保证结果准确,可将同一稀释度的菌液加到3个或3个以上的平板上,进行涂布、培养,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。
c.实验误差:利用稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。
③计算公式:每克样品中的菌株数=(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,
V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),
M代表稀释倍数。
3.实验流程
土壤取样―→样品的挑选能生长的―→―→
稀释微生物菌落将稀释液涂布到以尿素
为唯一氮源的培养基上4.鉴定分解尿素的细菌
(1)原理:CO(NH2)2+H2O――→CO2+2NH3;由于NH3的产生,培养基碱性增强,pH升高,因此可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。
(2)方法:以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌,若指示剂变红,则pH升高,说明该种细菌能分解尿素。
脲酶
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