复习与测试课堂实录【2】

微生物的培养与应用复习

第一课时

1．培养基

（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

（2）营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。

（3）种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。

2．无菌技术

（1）含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

（2）关键：防止外来杂菌的入侵。

（3）不同对象的无菌操作方法(连线)

3．大肠杆菌的纯化培养

（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

①操作步骤

计算→称量→溶化→灭菌→倒平板

②倒平板的方法及注意事项

a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。

b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。

c．丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。

（2）纯化大肠杆菌的方法

①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。

②纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。

③常用的微生物接种方法有两种

a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

b．稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

系列稀释操作(如图所示)：

涂布平板操作(如图所示)：

（3）菌种的保存方法

①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

4．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

（1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。

（2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。

（3）实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。

5．分解纤维素的微生物的分离

（1）纤维素酶

①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。

②作用

纤维素――→纤维二糖―――――→葡萄糖

C酶XC1酶葡萄糖苷酶（2）纤维素分解菌的筛选

①原理

②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

③培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。

④实验流程

培养基及其制备方法分析

1．下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是

成分

含量

蛋白胨

10 g 葡萄糖

10 g K2HPO4

2 g 伊红

0.4 g 美蓝

0.065 g 蒸馏水

1 000 mL A．从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基

B．该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨

C．该培养基缺少提供生长因子的物质

D．该培养基调节合适的pH后就可以接种使用

【参考答案】B

错误。

解题必备

1．培养基的配制原则

（1）目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。

（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。

（3）pH要适宜：细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真菌为5.0～6.0，培养不同微生物所需pH不同。学&科网

2．微生物对主要营养物质的需求特点

不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。

（1）自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。

（2）异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。

2．高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。研究者从热泉中筛选出了能高效生产高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如下图所示。

（1）Ⅰ号培养基从物理状态来看，属于固体培养基，配制时要加入________作为凝固剂，从用途来看属于选择培养基，应以________作为唯一碳源。

（2）配置固体培养基的基本步骤是__________。

A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌

B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板

D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板

（3）溶化时，烧杯中加入琼脂后要不停地________，防止琼脂糊底引起烧杯破裂。对培养基灭菌的方法一般为____________________。

（4）①过程是__________，②过程所使用的接种方法是________________法。

（5）部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放________分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈，挑选相应的菌落，接种到Ⅱ号培养基进一步分离纯化后，再对菌种进行_______培养。

【答案】（1）琼脂

淀粉

（2）C （3）搅拌

高压蒸气灭菌

（4）稀释

涂布分离

（5）淀粉酶

扩大

菌落再分离纯化可获得相应菌种，以后可以扩大培养用于生产。