附录4　常用的消毒灭菌操作方法优质课一等奖

江门市棠下中学2017～2018学年第一学期

高三生物导学案

编号：4

编制：黄凤嫦

审核：李玉钿

审核时间：2017.8.5 选修1 专题2 微生物的培养与应用

课题1 微生物的实验室培养（第1课时）

班别：____________ 姓名：____________ 学习目标

1、了解培养基的基本知识；

2、学习无菌操作的基本知识；

3、掌握制备牛肉膏蛋白胨的方法。

重点：无菌操作的基本知识。

难点：制备牛肉膏蛋白胨的方法。

目标达成（自评）

自评说明： A 完全掌握； B 明白但不会运用； C 不明白

【导】：结合生活实际和生产实践，谈谈你了解的无菌技术有哪些？

【思】：自主学习——阅读教材P14～17，思考下列问题：

问题导学

1、在微生物培养过程中可避免杂菌污染的常用方法有

哪些？

2、根据微生物的营养需求分析培养基的种类及成分，

分析牛肉膏蛋白胨的配制及操作注意事项有哪些？

探究未知：我的疑惑

【议】： 一．微生物的实验室培养

1．培养基

(1)概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质。

(2)营养构成：一般都含有 和无机盐。此外还需要满足微生物生长对 、氧气以及 的要求。

（详见《南方新课堂》P16“合作探究一.1表格”及“特别提醒”）

(3)种类：按照物理性质可分为 培养基和 培养基。

（分类详见《南方新课堂》P17“名师点津”）

(4)配制原则：

①目的明确：不同微生物需求不同，根据培养目的进行配制。

②营养全面协调，营养物质的浓度适宜、比例恰当

③适宜的pH值：可加入缓冲剂，细菌 ，真菌 ④特殊营养（生长因子）：微生物生长不可缺少的微量有机物如：维生素、

氨基酸、碱基等。如乳酸杆菌的培养基需添加 。

寄语：鲜花与荆棘同路，汗水伴欢笑齐飞！

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审核时间：2017.8.5 2．无菌技术

(1) 关键： 。

(2) 具体操作（阅读选修1P15“（二）无菌技术”的1-4方面）

（3）消毒和灭菌的比较

条件

应用范围

日常用品

不耐高温的液体如牛奶、啤仅杀死物体

消毒法

酒、果酒等

表面或内部的

微生皮肤、动植物组织表面、塑

消毒法

物（不包括芽料或手术器械等

孢和孢子）

如接种室、接种箱或超净工 消毒

作台等

如接种环、接种针等；试管

法

杀死物体内口或瓶口等

外

的玻璃器皿（吸管、培养皿）、微生物，包括

法

金属工具等

芽孢和孢子

法

培养基及容器

结果

常用方法

消毒法

较为

消毒

的物理或化学方法

灭菌

的理化因素

（注：两者原理相同，但实质不同。）

【练一练】选择以下材料或用具所需的无菌技术：

①吸管 ②培养细菌用的培养基 ③培养皿 ④实验操作者的双手 ⑤烧瓶 ⑥接种针 ⑦试管 ⑧接种环 ⑨玻璃棒

消毒： 灼烧灭菌： 干热灭菌： 高压蒸汽灭菌： 二．大肠杆菌的纯化培养

1. 最常用的细菌培养基：

2. 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：

计算 依据培养基 的比例，计算配制100mL培养基中各成分的用量

称量 牛肉膏比较

，可用

挑取，放在

上称取。称取时动作要

，称后要及时要盖上瓶盖。

溶化 牛肉膏和称量纸

+ 水

取出称量纸

加蛋白胨和氯化钠

加

补加蒸馏水至100mL。

灭菌

培养基：

灭菌；培养皿：

灭菌

倒平板

待培养基冷却至

左右时，在

附近倒平板。

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审核时间：2017.8.5 3.

倒平板（阅读选修1P17“倒平板”的具体操作图解及文字内容，思考并小组讨论课本问题1-4及以下问题）

问题5：图中哪些措施是防止杂菌污染的？

问题6：怎么确定所倒平板未被杂菌污染？

【展】：展示小组讨论结果。

问题1提示：可以 盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到 不烫手

即可。

问题2提示：通过 ，防止 的微生物污染 。

问题3提示：①

防止 的水珠落入培养基造成污染；

②使培养基表面的水 。

问题4提示：最好 这个平板培养微生物。防止 可能在

皿盖与皿底之间的培养基上 。

问题5提示：(略) 问题6提示： 检查。将灭菌的培养基放入37℃的温室中 24～48 小时，观察 以确定是否被污染或灭菌是否彻底。

【评】：

课堂小结——尝试构建“微生物的实验室培养”第1课时的知识体系

微生物的实验室培养

培养基

培养基的营养物质：

、

、

、

目的：

；

。

无菌技术

实验室的消毒方法：

、

、

、

实验室的灭菌方法：

、

、

、

制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：

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常用种类：液体培养基

固体培养基

加

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审核时间：2017.8.5 【检】：

1、判断正误：

（1）培养基中碳源物质不可能同时是氮源。（

）

（2）

培养基中只要有碳源、氮源、无机盐和水就能满足微生物的生长需要。（

）

（3）培养基倒平板后要进行高压蒸汽灭菌。（

）

（4）用酒精消毒时，酒精的浓度越高杀菌效果越好。（

）

（5）平板划线操作中，划完一个区域后要将接种环灼烧，再划下一个区域。（

）

2、见《课时训练》4-P9-1 3、见《南方新课堂》P19“迁移应用”

4、见《课时训练》4-P10-13

5、（2016全国卷Ⅰ理综，15分）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：

①配置培养基（成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）;

②制作无菌平板；

③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；

④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。 回答下列问题:

（1）该培养基中微生物所需的氮来源于_______________________。若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是_________________。

（2）步骤③中，实验组的操作是

。

（3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_____ __________现象。若将30（即36-6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法_______________（填“正确”或“不正确”）。 【练】：课后完成《新课堂》及《课时训练》4

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审核时间：2017.8.5 【答案】（1）牛肉膏、蛋白胨

琼脂 （2）将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间 （3）污染

不正确

一、无菌技术

消毒

仅杀死物体表面或内部

一部分 微生物

一般不能杀灭

煮沸消毒

灼烧灭菌

灭菌

强烈

的理化因素

杀死物体内外 所有的 微生物

能杀灭

作用强度

较为

温和的

的理化因素

作用程度

芽孢和

孢子

如接种环、接种针或日常食品、（100℃煮沸（在火焰的充分燃其他金属用具；试管罐装食品等

口或瓶口等

5-6min）

烧层灼烧）

如玻璃器皿（吸管、（70-75℃煮如牛奶、啤（干热灭菌箱培养皿）和金属用具30min或80℃酒、果酒等

160-170℃，1-2h）

等

常用方法煮15min）

及适用对化学药剂消皮肤、动植高压蒸汽灭菌

象

毒（酒精、氯物组织表（高压蒸汽灭菌锅如培养基等

气、石炭酸或面、塑料或100kPa,121℃,15-煤酚皂等）

手术器械等

30min）

紫外线消毒如接种室、

（紫外线灯接种箱或超照射30min）

净工作台等

原理

都是使微生物的蛋白质变性，从而杀死微生物。

一、培养基

1．培养基的成分

营养

含义

物质

碳源

能提供碳元素的物质

巴氏消毒

干热灭菌

作用

主要来源

构成生物体的物无机物：CO2、NaHCO3；

质，异养生物的能有机物：糖类、脂肪酸、石油、花生源物质

粉饼等

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审核时间：2017.8.5 氮源

水

无机盐

生长因子

能提供氮元素的物质

生命活动必不可少的物质

合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物

不仅是良好的溶剂，还是结构物质

细胞组成成分，调提供除碳、氮元节物质；某些化能素以外的各种自养型细菌的能元素

源；酶的激活剂

生长必不可少酶和核酸的成分

的微量有机物

特点

不加凝固剂

无机物：N2、NH3、氨盐、硝酸盐；

有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等

培养基、大气、代谢产物

培养基、大气

维生素、氨基酸、碱基等

2.培养基的分类

种类

液体培养基

物理

半固体培养基

性质

固体培养基

化学

成分

天然培养基

合成培养基

选择培养基

用途

鉴别培养基

应用

工业生产

观察微生物的运动、分类鉴定

微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏

工业生产

分类、鉴定

培养分离出特定微生物

鉴别微生物

加凝固剂（如琼脂）

含化学成分不明的天然物质

培养基成分明确或用一定化学物质配制

添加某物质，抑制杂菌生长，促进所需微生物生长

据微生物代谢特点，在培养基中加入某种指示剂

原理都是使微生物的蛋白质变性，从而杀死微生物。

一．微生物的实验室培养

1．培养基

(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

(2)营养构成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。

（详见《南方新课堂》P16“合作探究一.1表格”及“特别提醒”）

(3)种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。

（分类详见《南方新课堂》P17“名师点津”及“特别提醒”）

(4)配制原则：

①目的明确：不同微生物需求不同，根据培养目的进行配制。

②营养全面协调，营养物质的浓度适宜、比例恰当

③适宜的pH值：可加入缓冲剂，细菌中性或微碱性，真菌酸性

寄语：鲜花与荆棘同路，汗水伴欢笑齐飞！

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江门市棠下中学2017～2018学年第一学期

高三生物导学案

编号：4

编制：黄凤嫦

审核：李玉钿

审核时间：2017.8.5 ④特殊营养（生长因子）：微生物生长不可缺少的微量有机物如：维生素、氨基酸、碱基等。如乳酸杆菌的培养基需添加维生素。

2．无菌技术

(1) 关键：防止外来杂菌的入侵。

(2) 具体操作（阅读选修1P15“（二）无菌技术”的1-4方面）

（3）消毒和灭菌的比较

条件

结果

仅杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）

杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子

应用范围

日常用品

不耐高温的液体如牛奶、啤巴氏消毒法

酒、果酒等

皮肤、动植物组织表面、塑化学药剂消毒法

料或手术器械等

如接种室、接种箱或超净工紫外线消毒

作台等

如接种环、接种针等；试管灼烧灭菌法

口或瓶口等

玻璃器皿（吸管、培养皿）、干热灭菌法

金属工具等

高压蒸汽灭菌法

培养基及容器

常用方法

煮沸消毒法

较为温和消毒

的物理或化学方法

灭菌

强烈的理化因素

（注：两者原理相同，但实质不同。）

【练一练】选择以下材料或用具所需的无菌技术：

①吸管 ②培养细菌用的培养基 ③培养皿 ④实验操作者的双手 ⑤烧瓶 ⑥接种针 ⑦试管 ⑧接种环 ⑨玻璃棒

消毒： ④ 灼烧灭菌： ⑥⑧ 干热灭菌： ①③⑤⑦⑨ 高压蒸汽灭菌： ②

寄语：鲜花与荆棘同路，汗水伴欢笑齐飞！

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