课题3　血红蛋白的提取和分离特级教师教学实录

选修1专题5课题3血红蛋白的提取和分离（第一课时）

【学习目标】

a.说出从血液中初步获取血红蛋白的原理和方法。

b.说明凝胶色谱法的原理和方法。

【知识点梳理】

一、基础知识

（一）血红蛋白提取与分离的依据

1.

2. 3. 4. 5. （二）方法及原理

凝胶色谱法：根据 的大小分离蛋白质

1.凝胶色谱法 （1）材料：

（2）原理：

步骤：混合物上柱→洗脱→ 流动快、 流动慢→收集大分子→收集小分子

原理：当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度 ；相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度 。相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

二、实验操作

（一）样品处理

（1）红细胞的洗涤：

①目的： 。

②为防止血液凝固，应先加入柠檬酸钠。

③所用洗涤液：是五倍体积的 （质量分数为0.9%的NaCl溶液）。

④缓慢搅拌，采用低速短时间离心。 ⑤洗涤干净的标准是 。

（2）血红蛋白的释放：在 的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。

（3）分离血红蛋白溶液：（方法）离心。

试管中的溶液分为4层，从上往下依次是：

①无色透明的 。 ②白色薄层固体： 沉淀层。

③红色透明液体： 溶液层。

④暗红色沉淀层： 沉淀。

（4）透析：

①方法：取1mL血红蛋白溶液装入透析袋，将透析袋放入盛有300mL物质的量浓度为20 mmol/L （pH为7）中，透析12h。

②目的：去除样品中 的杂质。

③原理：透析袋能使 自由进出，而将大分子物质保留在袋内。

（二）凝胶色谱操作

1.凝胶色谱柱的制作 打孔→挖穴→安管→覆网→纱包→插管

。

2.凝胶色谱柱的装填

①材料：实验所用凝胶是交 。

②方法：凝胶用蒸馏水充分溶胀后，配成凝胶悬浮液，一次性缓慢倒入色谱柱内。不能有 存在。然后用300mL物质的量浓度为20 mmol/L 充分洗涤平衡12h，使凝胶装填紧密。 3.样品的加入和洗脱

使吸管管口沿管壁将样品缓慢加入 内，不要破坏凝胶面。待红色的蛋白质接近色谱柱低端时，用试管收集流出液，每5mL收集一管，连续收集。

【课前热身】

1.从细胞中提取某种特定的蛋白质比提取DNA难度大，其原因不是( )

A．蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件更敏感，更易失活

B．蛋白质的空间结构多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有统一的方法

C．提取某种特定的蛋白质需据其特性摸索提取的程序

D．提取血红蛋白程序可分为样品处理、粗分离、纯化、纯度的鉴定四大步

2.下列操作正确的是（ ）

A．分离红细胞时采用低速长时间离心

B．红细胞释放出血红蛋白只需要加入蒸馏水就可

C．分离血红蛋白溶液是低速短时间离心

D．透析时要用20mmol/L的磷酸缓冲液，透析12h

3.下列有关蛋白质提取和分离的说法，错误的是（ ）

A．透析法分离蛋白质的原理是利用蛋白质不能通过半透膜的特性

B．采用透析法使蛋白质与其他小分子化合物分离开来

C．离心沉降法通过控制离心速率使分子大小、密度不同的蛋白质分离

D．蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷电性相同的电极方向移动