课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数教案评析

课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

邢台市第二中学

王清立

【教学目标】

（一）知识与技能

利用选择培养基分离细菌，利用相关技术解决生活中有关微生物的计数

（二）过程与方法

分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性

（三）情感态度与价值观

形成无菌不在的概念，养成讲卫生的习惯

【教学重点】对土样的选取和选择培养基的配制

【教学难点】对分解尿素的细菌的计数

【教学方法】启发式教学

【教学工具】多媒体课件

【教学过程】

（一）引入新课

上节课我们学习了培养基的配置以及接种技术，下面来学习如何进行细菌的分离，获得所需要的目的微生物

（二）进行新课

1、基础知识

1) 尿素是一种基础的氮肥，农作物是不能直接吸收的，需要先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨和二氧化碳，这是因为细菌能合成脲酶。

2) 科学家能从热泉中把耐热的细菌筛选出来是因为热泉的高温淘汰了大部分微生物，这个方法也适合实验室中微生物的筛选，人为提供了有利于目的菌株生长的条件（营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其它微生物生长。

点评：生物适应一定环境，环境对生物有选择作用。所以通过配置选择培养基、控制培养条件等选择目的微生物。

（思考1）在该培养基配方中，为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的是尿素，琼脂的作用是凝固剂。

（思考2）该培养基对微生物具有选择作用，选择机制是：只有以尿素为氮源的微生物才能在该培养基上生长。

3) 在统计菌落数目，常用来统计样品中活菌数目的方法是：稀释涂布平板法，除此之外，显微镜直接计数也是常用方法。

2、实验设计

1）实验设计的内容包括实验方法、材料用具、实施步骤和时间安排等。

2）实验流程是：

配置土壤溶液→系列稀释→涂布平板与培养→菌落计数

3）土壤微生物主要分布在距离地表3-8cm的近中性土壤中，约70%—80%为细菌。

4）分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30-300之间、适于计数的平板。

5）

培养不同的微生物采用不同培养温度，细菌一般在30-37℃培养1-2d，放线菌一般在25-28℃培养5-7d，霉菌一般在25-28℃培养3-4d. 6）在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

7) 菌落的特征包括形状、大小、隆起程度、颜色等方面。

（思考3）土壤微生物种类最多数量最大的原因是什么?,土壤中营养物质含量丰富、环境条件适宜等。

8)实验过程

①取土样用的小铁铲和盛土样用的信封都要提前灭菌

②应在火焰旁称取土壤10g，将称好的土样倒入90ml无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。

③在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。

④实验时要对培养皿做好标记，注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

⑤为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。

（思考4）在研究未知微生物时无比规范操作，以防被致病微生物感染，实验后一定要洗手。

3.结果分析与评价

1）．对分离的菌种做进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。

2）．在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，PH升高。因此可以通过检测培养基PH变化来判断化学反应是否进行。

3）．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能分解尿素。

（思考5）测定饮水中大肠杆菌的方法是将一定的体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过计数得出水样中大肠杆菌数量。你认为在该实验中至少应取三个水样。

（三）课堂总结、点评

土壤中尿素分解菌分离筛选微生物的原理

的分离与计数

微生物计数方法与原理

→

有利于目的菌株的生长，抑制并阻止其它微生物生长

→

稀释涂布平板法、显微镜直接计数

对照设置与重复设置

（四）实例探究

例1对细菌群体生长规律测定的正确表述是

A.在液体培养基上

B.至少接种一种细菌

C.接种一个细菌

D.及时补充消耗的营养物质

解析：细菌群体生长规律的测定是人们在一定条件下进行的，这些条件是：一种细菌、恒定容积的培养基、液体培养基、定时测定细菌总数。在这些条件下才能测定细菌的生长规律。测定时只能用一种细菌的子细胞群体的变化规律表达微生物的生长，恒定容积是给微生物提供一定的生存环境；液体培养基才能通过样品推策细菌总数。若接种多种细菌，则会发生种间斗争而不能测定一种微生物的生长规律。在接种时要保证一定的接种量。

答案：A 例2在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是

A调整期

B对数期

C稳定期

D衰亡期

解析：种内斗争是一种生态因素，其反应了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。当生活空间充裕、营养充足的时候，种内斗争的程度是比较低的，随着微生物个体数目的增加，每个个体的生存空间就变小，营养物质也减少，每个个体对空间和资源的争夺越来越激烈，种内斗争就此激烈起来。因此，在稳定期内种内斗争最激烈。在衰亡期，

微生物的数目已经开始减少，PH已经极度不适于微生物生存，次级代谢产物积累到很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。

答案：C