课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优质课教案整理

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、课题目标

研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。

二、课题重点与难点[来源:Z&xx&k.Com] 课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制。

课题难点：对分解尿素的细菌的计数。

三、课题背景分析

教材从尿素在农业上的重要用途切入，介绍了土壤中能分解尿素的细菌，进而说明这种细菌的作用是能够合成分解尿素的酶。教学中，教师可以联系生产生活实际，使学生对尿素以及分解尿素的细菌形成一定的感性认识。教材还简要地介绍了尿素的发现过程以及尿素合成的历史，这些都是“科学、技术、社会”教育的丰富素材。最后，教材明确指出了本课题的目的，有助于学生准确把握课题的方向。

四、基础知识梳理

1、尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH才能被植物吸收利用。

3细菌脲酶2、

CO(NH2)2 + H2O

CO2+2NH3

（一）筛选菌株

1．实例----耐高温DNA聚合酶的寻找

美国科学家布鲁克（1966年）--在美国黄石公园的一个热泉中发现耐热细菌。这说明寻找菌株要到期相应的

中寻找。

2．

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。

（3）配制选择培养基的依据

根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养 ；的微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。

3．筛选菌株的培养基

KH2PO4

1.4g NaHPO4

2.1g MgSO4 H2O

0.2g 葡萄糖

10.0g 尿素

1.0g 琼脂

15.0g 思考：

1、该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 碳源： 氮源： 2、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？

能。只有产生脲酶的细菌才能利用 作为氮源而生存。

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。

4．选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基

（二）统计菌落数目

1.测定微生物数量的常用方法有 和 。

2.稀释涂布平板法统计样品中 的数目的原理

当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。

活体计数法----稀释涂布平板法

（1）操作方法：稀释涂布平板

→ 统计菌落数。

（2）原理：1个菌落→1个活菌。

（3）统计原则

①选 30∼300 个菌落的平板统计。

②每个稀释度取3个平板取其平均值。

3.统计结果：统计的菌落数往往比活菌的实际数目

，因此统计结果一般用

表示。

每克样品中的菌株数=

。

C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；

V:所用稀释液的体积；

M:稀释倍数。

（三）设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养 的培养基作为空白对照。

五、随堂练习

1．PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找 ( ) A．土壤中 B．海水中 C．热泉中 D．冷库中

2．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 ( )

A．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、尿素、琼脂、水

B．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、葡萄糖、琼脂、水

C．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、尿素、琼脂、水

D．KH2PO4、Na2HP04、MgS04·7H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水；

3.某同学在稀释倍数为10的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每克样品中的菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL) ( ) A．2.34×10 B．2.34×10 C．234 D．23.4 4.在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应10培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因 ( ) ①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误 ④没有设置对照

A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④

5.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为10的培养基中得到以下几种统计结果，正确的是… ( ) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和2墨6，取平均值163 66896思考：

1、1个菌落 1个活菌。

2、统计的菌落数 实际活的细菌数。

3、用稀释涂布平板法一定要重复实验，一般

至少要涂布3个平板。

4、重复实验结果中小于30菌落的不用。

D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是2l0、240和250，取平均值233 6．在10稀释度下求出3个平板上菌落数的平均值是63，那么每克样品中的菌落数是多少?

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