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课题3 血红蛋白的提取和分离一、课题目标本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离,使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法,并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理,为今后学习运用这些技术打下基础。二、课题重点与难点重点:凝胶色谱法的原理和方法。难点:样品的预处理;色谱柱填料

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课题3 血红蛋白的提取和分离课程导入及其完整教案

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课题3 血红蛋白的提取和分离课程导入及其完整教案

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课题3 血红蛋白的提取和分离

一、课题目标

本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离,使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法,并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理,为今后学习运用这些技术打下基础。

二、课题重点与难点

重点:凝胶色谱法的原理和方法。

难点:样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。

三、教学步骤

(一)基本原理

问题:蛋白质分离的总体思路是什么?

(根据蛋白质特性的差异如分子的形态和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等来分离蛋白质)

1、凝胶色谱法

(1)方法

问题:凝胶色谱法是根据蛋白质的何种特性来分离的?(相对分子质量大小)

问题:凝胶是何物?(微小的多孔球体,多糖类化合物,小球体内部有许多贯穿的通道)(P65图)

(2)分离原理

问题:利用凝胶是如何将蛋白质分离的?(P64)(P65图) 问题:在体外分离血红蛋白是否要用缓冲溶液?为什么?

(生物体内的各种生物化学反应都是在一定的PH下进行的,PH不同,蛋白质特性就可能发生改变,为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程,就必须保持体外和体内PH一致)

2、电泳

(1)概念

问题:何为电泳?

(2)原理

问题:根据蛋白质什么特性来分离?如何分离?(P65)

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(利用带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速度,从而实现样品中各种分子的分离)

(二)实验操作

问题:蛋白质提取和分离的一般步骤?(四步:样品的处理、粗分离、纯化、纯度鉴定)

1、样品处理:

红细胞洗涤→血红蛋白质释放→分离血红蛋白质溶液→透析(粗分离)

问题:为什么要透析?(P67)

2、凝胶色谱操作

凝胶色谱柱制作→凝胶色谱柱的装填→样品的加入和洗脱

问题:凝胶色谱柱装填要注意什么?为什么?

(不能有气泡。因为有气泡存在无效空隙,搅乱洗脱次序)

问题:该普测操作注意哪些?(P69)

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