课题3　血红蛋白的提取和分离板书设计

《血红蛋白的提取和分离》教学设计

教学目标

（一）知识与技能

1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白

2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理

（二）过程与方法

体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤

（三）情感、态度与价值观

初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神

教学重难点

课题重点

凝胶色谱法的原理和方法

课题难点

样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填

教学工具

多媒体

教学过程

【导入】

红细胞在人体内是一种非常重要的细胞,对于携带氧气和二氧化碳至关重要,但是你们知道为什么红细胞能携带这些气体吗?因为红细胞中含有一种特殊的蛋白质——血红蛋白。血红蛋白究竟是什么,我们要研究它,首先就要进行提取和分离它。

（二）进行新课

一 基础知识

1．凝胶色谱法（分配色谱法）：

回顾以前知识：回顾蛋白质的有关内容。

蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和

力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。

新知识的教学：

提出问题让学生找出凝胶色谱法的有关内容。（1）凝胶色谱法的原理。（2）凝胶材料特点。（3）分离过程。

学生：阅读课本64页基础知识部分，回答老师提出的问题。

讲解：（1）分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。

（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。

（3）分离过程：

混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子

＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。

2.缓冲溶液

讲解缓冲溶液有关内容：

（1）.了解常见缓冲作用：运动鞋鞋底的缓冲气垫。

（2）.缓冲溶液的原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。

（3）.缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。

学生：阅读课本65页相关内容，了解缓冲溶液的原理和作用。

3.电泳

讲解电泳的有关知识：

概念：指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。

（2）凝胶电泳法的原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方

向、阻力不同，导致不同

蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。

学生：阅读课本65—66页内容及图5-15，自学电泳和凝胶电泳的有关知识。

（3）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺经胶电泳等。

（4）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。

二．实验设计

2.1蛋白质的提取和分离一般分为哪些基本步骤？

样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。

思考：是否所有种类的蛋白质的提取和分离都是这样的？为什么？

不是。因为蛋白质的来源和性质不同，分离方法差别很大。

2.2选择实验材料

（1）你认为鸟类血液和哺乳动物血液中，最好哪种血液来提取血红蛋白？为什么？

哺乳动物血液。因为该细胞中没有细胞核，血红蛋白含量高。

（2）请阅读教材，认识哺乳动物血液组成及血红蛋白性质。并思考回答下列问题：

血液由_____和 ______两部分组成。

血细胞中______细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是 ____。

该化合物是由_____和______构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的____基团。

2.3从红细胞中分离出血红蛋白的过程为：洗涤红细胞、释放血红蛋白、分离血红蛋白、透析。洗涤红细胞的目的是什么？

除去血浆蛋白的杂蛋白，有利于后续步骤的分离纯化。

红细胞的洗涤过程为

血液＋柠檬酸钠→低速短时离心→吸出上层血浆→红细胞＋5倍体积生理盐水

→缓慢搅拌10min→低速短时离心→吸出上清液→反复洗涤直至上清液无黄色

思考：加入柠檬酸钠有何目的？为什么要低速、短时离心？为什么要缓慢搅拌？

防止血液凝固；防止白细胞沉淀；防止红细胞破裂释放出血红蛋白。

思考：你有什么方法将红细胞中的血红蛋白释放出来？

加入蒸馏水，用玻璃棒快速搅拌一段时间。

补充：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜，有利于血红蛋白的释放和分离。此时，红细胞破碎混合液中不仅含有血红蛋白，而且还含有细胞破碎物、脂质、甲苯有机溶剂等。怎样除去这些杂质呢？由于它们的密度不同，科学家采取了离心分离的方法：

红细胞破碎混合液→中速长时离心（2000c/min×10min）→滤纸过滤除去脂质→

分液漏斗分离出血红蛋白

2.4如何除无机盐离子和小分子有机物质呢？。

透析。半透膜的选择透过性，大分子物质不能通过半透膜，离子和小分子能够通过半透膜。

在透析过程中，血红蛋白溶液中的离子和小分子不断通过半透膜扩散进入到pH＝7的磷酸缓冲液中。

思考：为何使用pH＝7的磷酸缓冲液？为什么缓冲液量远多于血红蛋白溶液量？

维持血红蛋白的正常特性。有利于杂质分子充分地向外扩散。

总结：通过以上四个基本过程，红细胞中的血红蛋白就被提取出来。但其中还含有其他种类的蛋白质分子（如呼吸酶等）。怎样将杂蛋白与血红蛋白分离开来呢？我们来研究蛋白质提取和分离的第二个步骤――粗分离（凝胶色谱操作）。

2.5凝胶色谱分离蛋白质包括：制作色谱柱、装填色谱柱、样品加入和洗脱。

根据教材图5－19，说出制作色谱柱需要的材料。

橡皮塞2个、打孔器、小刀、移液管、尼龙纱、尼龙网、玻璃管、尼龙管等。

色谱柱的制作过程：准备材料→加工橡皮塞→安装色谱柱

下面进行第二步――凝胶色谱柱的装填。请阅读教材：

色谱柱的装填过程。

样品加入和洗脱。其基本过程是：

调节缓冲液面→加入蛋白质样品→调节缓冲液面→洗脱→收集分装蛋白质

至此，血红蛋白即可得到粗分离。在整个操作过程中，应当注意以下事项：

（1）红细胞的洗涤：

洗涤次数不能过少；低速、短时离心。

（2）凝胶的预处理：

沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡

（3）色谱柱的装填：

装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。

（4）色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。

课后小结

本课题重在让学生了解生物科学在蛋白质领域的进展，说明提取、分离高纯度的蛋白质的重要性和必要性，并学习一些蛋白质分离和提取的基本技术。教师可以发挥学生的主动性，让学生介绍当前有关蛋白质研究的新进展，激发学生的学习兴趣，然后指出本课题的学习意义，让学生初步体会分离纯化蛋白质的过程和方法

板书设计

课题3

血红蛋白的提取和分离基础知识

根据蛋白质的特性来分离不同种类的蛋白质

凝胶的组成

1.凝胶色谱法

分离的原理

分离的过程

组成

2.缓冲溶液

作用

电泳法分离的原理

3.电泳法种类

琼脂糖凝胶电泳

SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳

二．实验设计

2.1蛋白质的提取和

分离一般分为哪些基本步骤？

2.2选择实验材料