课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀获奖教案

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(第二课时) 一、教学目标

1.利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

2.分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性

3.形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

二、教学重点

对土样的选取和选择培养基的配制

三、教学难点

对分解尿素的细菌的计数

四、教学方法

启发式教学

五、教学工具

多媒体课件

六、教学过程

导入：回忆上节课内容回答以下问题：

老师问：1、判断培养基中是否有杂菌污染？

请学生回答：将未接种的培养基与接种的培养基同时进行培养

2、判断选择培养基是否具有筛选作用？

请学生回答：将完全培养基（营养成分齐全）接种后培养，观察菌落数目,进行对比得出结论

一

实验设计

实验设计的内容包括实验方案、材料用具、实施步骤和时间安排等。

㈠.土壤取样：

从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。

老师提问：1、为什么要去掉表层土3cm？

学生看书回答：土壤微生物主要分布在距地表3～8cm的近中性土壤中，约70％～80％为细菌。

2、在土壤取样中怎么实现无菌操作？

请学生回答：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌

㈡.制备培养基

老师：请同学们根据这一课题的第一节讲的内容想一想我们应该准备几种培养基呢？

请学生回答：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基；

牛肉膏蛋白胨培养基(基础培养基）

（三）样品的稀释

老师：请同学们看教材24页回答旁栏思考题：1、为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？ 答：分离不同的微生物采用不同的稀释度，其原因是不同微生物在土壤中含量不同，其目的是保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。细菌稀释度为104、105、

1

106，放线菌稀释度为103、104、105，真菌稀释度为102、103、104。

2、该过程怎样保证无菌操作？

应在火焰旁称取土壤10g，在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞；

在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作

㈣.取样涂布

老师问：1、如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？ 请学生回答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。 2、怎样说明稀释操作比较成功？

如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验

3、请问每一个稀释浓度下需要多少个以尿素为唯一氮源的选择培养基和多少个牛肉膏蛋白胨培养基

答:3个以尿素为唯一氮源的选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基

该过程需要用的培养基等较多，所以实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等

㈤.微生物的培养与观察

培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在30～37℃培养1～2d，放线菌一般在25～28℃培养5～7d，霉菌一般在25～28℃的温度下培养3～4d。

在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。

点评：菌种中有些菌体增殖快，有些菌体增值慢，所以培养时间要充足，使得每个菌体都能形成肉眼可观察到的菌落。

菌落的特征包括

形状、大小、隆起程度、颜色

等方面。

思考：土壤微生物种类最多、数量最大的原因是什么？

学生答：土壤中营养物质含量丰富，环境条件适宜等。

（六）、细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数目在30—300的平板进行计数。在同一稀释浓度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目

思考：请你设计一个表格来完成以上的计数，怎么设计呢? 二、操作提示

1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。

2）应在火焰旁称取土壤

10 g。将称好的土样倒入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，塞好棉塞。

3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。

4）实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。

5）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当事先规划时间。

2

注意：在研究未知微生物时务必规范操作，以防被致病微生物感染，实验后一定要洗手。

三．结果分析与评价

1、

培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落

通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。

牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落

2、样品的稀释操作是否成功

如果得到2个或2个以上菌落数目在30—300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数

3、重复组的结果是否一致

如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，需要分析产生差异的原因

四.课外延伸

1

对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。

原理：在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨

。氨会使培养基的碱性增强，PH 升高

。因此，我们可以通过检测培养基

pH 变化来判断该化学反应是否发生。

方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素

。

2 测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到

伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记述得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取三个水样。

本课题知识小结：

3

板书设计：

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(第二课时) 一

实验设计

1.土壤取样 2 .制备培养基

3 样品的稀释

4 .取样涂布

5 .微生物的培养与观察6 细菌的计数

二、操作提示

三．结果分析与评价

四.课外延伸

五、教学反思：

本节课可以从尿素在农业上的重要应用切入，介绍能分解尿素的细菌，进而说明这种细菌的作用是能够合成分解尿素的酶。在教学过程中，可以联系生产生活实际，使学生对尿素以及分解尿素的细菌形成一定的感性认识。对于实验中的对照原则，可以指导学生分组讨论，在掌握微生物分离技术的同时巩固实验设计的基本原则。

巩固练习：

1.使用选择培养基的目的是（

）

A.培养细菌

B.培养真菌

C.使需要的微生物大量繁殖

D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别

2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是(

)

A.CO2和N2

B.葡萄糖和NH3

C.CO2和尿素

D.葡萄糖和尿素

3.下列说法不正确的是（

）

A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶

B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值

C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度

D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（

）

A.较多的氮源物质

B.较多的碳源物质

C.青霉素类药物

D.高浓度食盐

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