复习与测试主要内容及教案内容

微生物的培养与应用

一、选择题(每小题2.5分，共50分) 1．防止外来杂菌的入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是(

) A．实验室内可以用紫外线或化学药剂进行消毒

B．接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌

C．在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染

D．使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境

B 2．下列有关培养基配制原则的叙述，正确的是(

) A．任何培养基都必须加入碳源、氮源、矿质元素及水

B．碳源和氮源必须具有一定比例，碳元素的含量最多，其次为氮元素

C．微生物的生长除受营养因素影响外，还受pH、氧、温度等条件的影响

D．营养物质的浓度越高越好

C 3．下列关于微生物实验室培养的叙述，错误的是(

) A．平板划线法是在培养基上连续划线以纯化菌种的接种方法

B．培养霉菌时需将培养基的pH调至中性或微碱性

C．培养硝化细菌时可不用在培养基中加有机碳源

D．培养乳酸菌时需要提供无氧的条件

B 4．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时(

) ①可以用相同的培养基

②都需要使用接种针进行接种

③都需要在酒精灯火焰旁进行接种计数活菌

A．①②

B．③④

C．①③

D．②④

C 5．下列有关刚果红染色法的叙述，错误的是(

) A．刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入

B．刚果红可以在菌落形成后加入

C．刚果红在菌落形成前倒平板时加入，加入的刚果红不需要灭菌

D．在菌落形成后加入刚果红时，刚果红不需要灭菌

C 6．下列常用的无菌操作中错误的是(

) A．用酒精擦拭双手

B．玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭

C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行

D．用氯气消毒水源

B ④都可以用来

7．牛奶、吸管、接种环、培养基、空气消毒和灭菌的方式依次是(

) ①灼烧灭菌

②巴氏消毒法

③干热灭菌

④紫外线消毒

⑤高压蒸汽灭菌

A．②③①⑤④

C．②①③⑤④

A 8．(2018·苏州调研)关于实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作，下列说法正确的是(

) A．配制培养基、倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行

B．倒平板时，倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖

C．划线接种时，灼烧接种环后立即进行再次划线

D．划线接种结束后，需将平板倒置后放入培养箱中培养

D 9．下列有关平板划线操作的叙述，错误的是(

) A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物

B．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上的菌种

C．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连

D．划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者

C 10．用稀释涂布平板法统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。原因是(

) A．平板上的一个菌落就是一个细菌

B．菌落中的细菌数是固定的

C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌

D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同

C 11．下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是(

) A．利用稀释涂布平板法可对微生物进行计数

B．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落

C．在无氮培养基中加入酚红指示剂可用来鉴定尿素分解菌

D．利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌

C 12．如表所示为某微生物培养基的配方。下列叙述错误的是(

) 成分

NaNO3

K2HPO4

KCl MgSO4·7H2O 0.5 g FeSO4

(CH2O) 30 g H2O 青霉素

0.1万单位

B．②⑤③①④

D．⑤①③②④

含量

3 g 1 g 0.5 g 0.01 g 1 000 mL A.此培养基属于液体培养基，其中的碳源是(CH2O) B．配制培养基时，溶化后分装前，必须要进行的是调整pH和灭菌

C．接种时应在酒精灯火焰附近操作

D．若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去青霉素，加入的是纤维素粉

D 13．在培养细菌的实验过程中，“温度”的控制合理的是(

) A．必须在37 ℃下才能获得单菌落

B．可在28 ℃下培养

C．倒平板时应该让温度降到40 ℃

D．对培养基灭菌时应该是121 ℃

D 14．“筛选”是生物学中培育生物新类型常用的手段，下列有关技术过程中不可能筛选成功的是(

) A．在无氮培养基上筛选圆褐固氮菌

B．在不含精氨酸的培养液中筛选能合成精氨酸的杂交细胞

C．用含青霉素的培养基筛选酵母菌和霉菌

D．用不含碳源的培养基筛选根瘤菌

D 15．下列关于分离尿素分解菌和纤维素分解菌实验的叙述，错误的是(

) A．前者需要尿素为唯一的氮源，后者需要以纤维素为主要的碳源

B．尿素分解菌能产生脲酶，纤维素分解菌能产生纤维素酶

C．两个过程中都需要梯度稀释

D．刚果红染色法也可以用于鉴定尿素分解菌

D 16.在农业生产研究上，常需要进行微生物的培养和计数。下面是某培养基的配方中的部分成分：NaNO3、KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、KCl、H2O。在实验室里进行微生物培养时，进行的接种过程如图所示，则下列说法错误的是(

) A．此实验采用了平板划线法对微生物进行接种

B．每次划线前要对接种环进行灼烧，冷却后从上一区划线末端开始划，首尾区不重叠

C．若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则除去NaNO3成分即可

D．若用于培养纤维素分解菌，应加入纤维素粉

C 17．下列关于四种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的描述，其中正确的一组是(

)

能源

碳源

氮源

代谢类型

A.硝化细菌、乳酸菌

C．酵母菌、衣藻

D 硝化细菌

氧化NH3

CO2

NH3

自养需氧型

乳酸菌

分解乳酸

糖类

N2

异养需氧型

B．乳酸菌、酵母菌

酵母菌

固定N2

糖类

N2

异养需氧型

衣藻

利用光能

CO2

NO3

自养需氧型

－

D．硝化细菌、衣藻

18．下列说法错误的是(

) A．从牛胃中分离纤维素分解菌并计数，与分离醋酸菌相比，最主要的实验条件差别是保证无氧环境

B．用活菌计数法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目少

C．提取和分离纤维素酶的过程中，为了避免外界酸和碱对酶活性的影响，需向提取液和分离液中添加缓冲溶液

D．若探究纤维素酶活性的最适温度，可设置不同的温度梯度进行空白对照

D 19．实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 ℃条件下恒温培养3 d，结果如图所示。从实验结果分析，下列叙述错误的是(

)

A．链霉素能阻止结核杆菌的生长

B．链霉素对结核杆菌比对霍乱弧菌更有效

C．链霉素对结核杆菌比对伤寒杆菌更有效

D．链霉素可以用于治疗伤寒

D 20．某种细菌菌株需要亮氨酸才能生长，但此菌株对链霉素敏感。实验者用诱变剂处理此菌株，想筛选出表格中细菌菌株类型，则配制相应选择培养基类型正确的是(

) 选项

A B C D 筛选出不需要亮氨酸的菌株

L＋

S＋

L－

S－

L－

S＋

L＋

S－

筛选出抗链霉素的菌株

L－

S－

L＋

S＋

L＋

S＋

L－

S－

筛选出不需要亮氨酸的抗链霉素的菌株

L＋

S－

L－

S＋

L－

S－

L＋

S＋

注：L代表亮氨酸，S代表链霉素；＋代表加入，－代表不加入。

B 二、非选择题(除注明外，每空1分，共50分) 21．(10分)某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如表：

KH2PO4

1.4 g Na2HPO4

2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 蛋白胨

1.0 g 葡萄糖

10.0 g 尿素

1.0 g 琼脂

15.0 g (1)为了成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)，其生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的______和________。根据该培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？________(填“能”或“不能”)，原因是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。

(2)统计每克土壤样品中活菌数目，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的________就能

大约推测出样品中活菌数。用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量________，因为____________________________________________。

(3)在某一稀释度下平板上的平均菌落数为50个，所用稀释液的体积为0.2 mL，稀释倍数为105时，每毫升样品中的菌落数为________个。

(4)一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是________________，为避免此种现象，应对菌液进行________。

答案：(10分)(1)尿素

葡萄糖

不能

培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只分解尿素的微生物

(2)菌落数目

多

当两个或多个细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落

(3)2.5×107

(4)菌液浓度过高

梯度稀释

22．(8分)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：

①配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O)；

②制作无菌平板；

③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；

④将各组平板置于37 ℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

回答下列问题：

(1)该培养基中微生物所需的氮来源于____________。若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是________。

(2)步骤③中，实验组的操作是_______________________________________________ ___________________________________________________________________。(4分) (3)若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了________现象。

若将30(即36－6)个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法________(填“正确”或“不正确”)。

答案：(8分)(1)牛肉膏、蛋白胨

琼脂

(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间(4分)

(3)污染

不正确

23．(10分)某同学欲利用所学习的微生物培养知识，通过实验来证明痰液中含有细菌，来倡导同学们不要随地吐痰，以下是他进行的实验内容。回答下列问题：

(1)制备供细菌生长的培养基。实验室常用牛肉膏蛋白胨固体培养基，制备该培养基的步骤是：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板，其中灭菌常用的方法是____________，在溶化之后、灭菌之前还需要调________；平板冷凝后，还需要将平板倒置，主要目的是防止__________________________。

(2)琼脂是一种从红藻中提取的多糖，在培养基中常常加入一定量的琼脂，添加琼脂的目的是______________________________________。

(3)为了使实验结果更有说服力，该同学设置了空白对照组和若干实验组，其中对照组的作用是__________________________________。(2分) (4)微生物接种的方法有稀释涂布平板法和平板划线法，其中平板划线法并不适合用于微生物的计数，其主要原因是______________________________(2分)。某同学利用稀释涂布平板法来统计样品中细菌的数目，他在稀释倍数为104的培养基中测得平板上菌落数的平均值为163，则每毫升痰液样品中的细菌数是(所用稀释液的体积为0.2 mL)____________(2分)。

答案：(10分)(1)高压蒸汽灭菌法

pH

皿盖上的水珠落入培养基，造成污染

(2)作为凝固剂，使液体培养基

凝固为固体培养基

(3)排除实验组中非测试因素对实验结果的影响(合理即可，2分)

(4)不能将菌液中的微生物充分分离开来(2分)

8.15×106个(2分) 24．(11分)如图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。请分析回答下面的问题：

(1)本实验所需要的培养基为选择培养基，碳源为______________。

(2)实验原理是____________________________________________________________ ___________________________________________________________________。(2分) (3)①→③重复培养的目的是_____________________________________________。

(4)⑤的菌落中大部分是降解________的微生物。

(5)⑥为________________组，⑦为________________组，设置⑥的目的是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。

(6)⑤→⑥采用________法，接种到⑥的培养基中，在操作过程中为防止污染应注意的事项是________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。(2分) 答案：(11分)(1)对羟基苯甲酸

(2)利用以对羟基苯甲酸为唯一碳源的选择培养基，经富集培养，选出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物(2分)

(3)增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例

(4)对羟基苯甲酸

(5)对照

实验

说明通过富集培养的确得到了欲分离的目标微生物

(6)单菌落挑取

接种环在火焰上灼烧灭菌，烧红的接种环应在火焰旁冷却，同时，打开皿盖挑取菌落接种到试管中，并塞好棉塞，再把接种环在火焰上灼烧，杀灭残留物(2分) 25．(11分)酵母菌是一种真菌，与人们的日常生活密切相关，也是现代生物技术研究常用的模式生物，请回答下列有关问题：

(1)土壤中富含各种微生物，将其浸出液接种到特定培养基上，可得到酵母菌，这一过程叫做____________；不同培养基的具体配方不同，但一般都含有______________________________等营养物质。

(2)无菌操作是微生物培养最基本的要求，在培养酵母菌的过程中，对培养基、接种环所采用的灭菌方法分别是__________________________________。

(3)某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌(可利用空气中的N2作为氮源)和酵母菌混在了一起。请你设计实验，分离得到纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌。

①实验原理：________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。(2分) ②材料用具(略)

③主要实验步骤：

第一步：制备两种培养基，一种是________培养基，另一种是________的培养基。分别分成两份，依次标上A、A′和B、B′，备用。

第二步：分别向A、B培养基中接种________。

第三步：接种后，放在恒温箱中培养3～4 d。

第四步：分别从A、B培养基的菌落中挑取生长良好的菌种，接种到A′和B′培养基中。

第五步：接种后，把A′和B′培养基放入恒温箱中培养3～4 d。

④回答问题：

a．第四、五两个步骤的目的是____________________________________________。

b．在操作中，为保证无杂菌感染，实验中应采用的主要措施有________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。(2分) 答案：(11分)(1)酵母菌的分离

水、无机盐、碳源、氮源

(2)高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌

(3)①圆褐固氮菌是自生固氮菌，能在无氮培养条件下生长繁殖，而酵母菌不可以；青霉素不影响酵母菌等真菌的生长繁殖，但会抑制圆褐固氮菌的生长繁殖(2分) ③无氮

加青霉素

混合菌

④a.获得纯度较高的圆褐固氮菌和酵母菌

b．对培养基进行高压蒸汽灭菌；接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌；接种过程在酒精灯火焰附近进行(2分)