课题3　血红蛋白的提取和分离名师课堂实录

2.人体血浆中的H2CO3/NaHCO3、NaH2PO4/Na2HPO4等的作用是 ，体内细胞或物质在体外是否需要与体内一样的环境条件才能保持原有的生物活性？ 。怎样使其保持与体内一样的酸碱度呢？ 。

3.电泳时，带正电和负电的蛋白质在电场中的迁移方向是

；若蛋白质的带电性质和数量相同，但蛋白质的分子大小不同，则蛋白质在电场中的迁移情况是 。叶绿体色素分离使用的支持物是 ，电泳分离蛋白质使用的支持物是 。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的迁移率完全取决于 。

二、实验操作

1.分析与样品处理有关的问题：

（1）分离红细胞离心速度不能过高和时间过长的原因是

。洗涤红细胞的目的是

。用生理盐水洗涤红细胞的原因是

。洗涤次数不能过少的原因是

。洗涤成功的标志是

。

（2）在红细胞液中加入蒸馏水的目的是

，甲苯的作用是

，充分搅拌的目的是

。

（3）将血红蛋白从混合液中分离出来所使用的方法是

。

右图是分离结果示意图，

图中①②③④的物理性质分别是

，

主要成分分别是

。

将血红蛋白从中分离出来要经过

过滤和

分离两步。

（4）右图装置用于

，

（5）其目的是

。

（6）若B是血红蛋白溶液，则A是

。

2.以下是凝胶色谱柱的制作过程图解，正确的顺序是

。

打孔

安装

玻璃管

挖出凹穴

a b c d e f

3.右图是装填的凝胶色谱柱，据图分析：

（1）图中“G”表示

，75表示

。加入前需放在洗脱液中膨胀，为了加速膨胀，可用沸水浴加热，这样不但可以节约时间，而且可以

。

（2）装填凝胶时要先打开[a ]

，然后一次性倒入并轻轻敲动色谱柱，目的是

。装填过程中若发现有气泡存在，必须重装，因为气泡会

，降低分离效果。

（3）装填完后，为了使凝胶装填紧密，还需使用

充分洗涤平衡凝胶12h。该过程中出现何种现象需要重新装填凝胶色谱柱？

。

透析袋

A B ①

②

③

④

4.下图A是样品的加入示意图，图B是洗脱示意图。

e

样操样作品

品

压

a b c d

A B

正确的操作次序是

。

（1）加样前需先让凝胶面上的缓冲液下降至与凝胶面平齐，操作方法是

。加样时（2）洗脱液e是

，洗脱时要打开

，待

接近色谱柱底端时，用试管收集流出液。

（3）如何确定色谱柱的制作是成功的？

。

【课堂巩固】

1.下列有关血红蛋白提取和分离实验的叙述错误的是（ ）

．．A.样品的处理就是通过一系列操作收集到血红蛋白溶液

B.通过透析可以去除样品中分子质量较大的杂质，此为样品的粗提取

C.通过凝胶色谱法可除去杂质蛋白，即样品的纯化

D.可通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血红蛋白的纯度

2.凝胶色谱法是一种快速而又简单的分离技术，请据图回答相关问题：

（1）a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是 ，

原因是 。

（2）自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构

可由 替代。

（3）凝胶色谱柱的直径大小会影响分离的效果吗? 。图中a和b的分离度与凝胶色谱柱的高度有关吗? 。

（4）在哪些情况下需要重装凝胶色谱柱？ 。

（5）洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体

(填“相同”或“不同”)，洗脱时，对洗脱液的流速要求是

。

（6）对样品进行粗分离的方法是 ，纯化的方法是 。

判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯化的鉴定。

在鉴定的方法中使用最多的是 凝胶电泳。

○···

○

○·○

○

···

○○

a

b

c

d