课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数ppt专用说课稿内容

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

【教学目标】

（一）知识与技能

利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数

（二）过程与方法

分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性

（三）情感、态度与价值观

形成无菌不在的概念，养成讲究卫生的习惯

【课题重难点】

重点：对土样的选取和选择培养基的配制

难点：对分解尿素的细菌的计数

【教学方法】

启发式教学

【教学工具】

多媒体课件

【教学过程】

1.菌种的筛选： (1)自然界中目的菌株的筛选：

①依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

②实例：PCR技术过程中用到的耐高温的Taq DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中提取出来的。

(2)实验室中目的菌株的筛选：

①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。

②方法：利用选择培养基分离。

2.选择培养基： (1)概念：指允许特定种类的微生物生长，同时阻止或抑制其他种类微生物生长的培养基。

(2)选择培养基的制备原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某一化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。

(3)选择培养基的制备方法：在培养基中加入某种允许特定种类微生物生长，抑制或阻- 1 -

止其他种类微生物生长的化学成分。

(4)选择培养基的用途：使混合菌株中的目的菌变成优势菌，提高该菌的筛选率。

(5)实例：在培养基中以尿素为唯一的氮源，可得到能利用尿素的微生物。(所需培养基的配方如表所示) 思考1：能在选择培养基上生长的肯定是所筛选的目的菌吗？

原则上选择培养基只能允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能在培养基上生长的微生物不一定都是所需要的微生物，还需进一步验证。

3.实验流程

(1)土壤取样：

①土壤取样原因：土壤有“微生物的天然培养基”之称。同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

②要求：富含有机质(富含有机质的土壤层中微生物数量大、种类多)，酸碱度接近中性且潮湿(土壤中的微生物大约有70%~80%是细菌，此环境适宜细菌的生长)的土壤。

③取样部位：先铲去表层土3cm左右，再取距地表3~8cm的土壤层，将样品装入事先准备好的信封中。(取样用的小铁铲和盛土样的信封都要经过灭菌) (2)制备培养基：以牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组，以尿素为唯一氮源的培养基作为实验组，用来判断选择培养基是否具有选择的作用。

(3)样品的稀释与涂布平板：

①取样稀释：在火焰旁称取土壤10g，放入盛有90mL无菌水的三角瓶中，振荡使土样与水充分混合。 (稀释原因：样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目) ②取样涂布 (4)微生物的培养与观察：

①培养：将涂布好的培养皿放在适宜温度下倒置培养。随着培养时间的延长，会有不同的菌落产生。比较牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。

②计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

③观察：微生物的菌落特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面。仔细观察分离到的菌落、最好以表格的形式将不同菌落的特征记录下来。

4.结果分析

(1)是否有杂菌污染：

①对照组培养基上无菌落生长⇒未被杂菌污染

②实验组培养基上菌落数偏高⇒被杂菌污染

- 2 -

③实验组培养基上菌落形态多样，菌落数偏高⇒培养基上可能混入其他氮源

(2)选择培养基是否有筛选作用：

牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目⇒选择培养基具有筛选作用

(3)样品的稀释操作：

如果得到了2个或2个以上菌落数在30~300的平板⇒操作成功

(4)重复组的结果：

若选取的是同一种土样，统计结果应该接近。

5.分解尿素的细菌的进一步鉴定

(1)鉴定原理：细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基碱性增强，PH升高。因此可以通过检测培养基PH的变化来判断该化学反应是否发生。

即：CO(NH2)2+H2O――→脲酶 CO2＋2NH3 (2)鉴定方法：以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则PH升高，说明该种细菌能分解尿素。

- 3 -