课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优质课教案推荐

课题

一、研究思路

1．筛选菌株

2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时 或 其他微生物生长。

即采用 培养基来培养。 (2)配制选择培养基的依据：根据选择培养的菌种的生理代谢特点来配制。例如，培养基中仅以

作为唯一氮源可以选择出分解尿素的微生物；培养基中不加入有机物可以选择培养 微生物。 的培养基可用来分离固氮微生物. 2．统计菌落数目

（1）测定微生物数量的常用方法有 和 。

（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理

当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在

的平板进行计数。

思考：利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是什么？

3．设置对照

设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以 的培养基进行培养作为空白对照。

二、实验设计：

根据图示2－7填写以下实验流程：

配制实验操作步骤如下：

系列

涂布平板与培养

菌落

1． 取样：土壤微生物主要分布在距地表

cm的近

性土壤中，约 为细菌。从肥沃、湿润的土壤中取样。应先铲去 cm左右的表层土，再取样，将样品装入事先准备好的

中。

2．制备培养基：准备牛肉膏蛋白胨培养基和 培养基

将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明

显 选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。

3．微生物的

与观察

将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、10、10……

依次等比稀释至10稀释度，并按照由10～10稀释度的顺序分别吸取

进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。

将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。并挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 指示剂的培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应，77312

初步鉴定该种细菌能否分解尿素。

培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌一般在 ℃培养1～2d，放线菌一般在 ℃培养5～7d，霉菌一般在 ℃的温度下培养3～4d。

4．细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

菌落的特征包括 等方面。

三、操作提示：

1）取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要

。

2）应在 旁称取土壤。将称好的土样倒入盛有 的锥形瓶中，塞好 。

3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在 旁进行。

4）实验时要对 作好标记。注明 等。

5)装系列稀释菌的试管在试管架上最好按 放置。

6）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当 。

四、结果分析与评价

1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏 （高、低）；若培养物混入其他氮源，则菌落形态 （单一、多样），菌落数 （高、低），难以选择出分解尿素的微生物。

2.选择每个平板上长有 个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能 ，否则表示实验不精确。

五、课题延伸：

1．对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助 的方法。在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的 将尿素分解成了 。使培养基的碱性 ，PH 。在以 为唯一氮源的培养基中加入 指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变 ，说明该细菌能够 。

2.细菌的数目还可以通过 来测定，测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现 色，通过统计计算得出水样中大肠杆菌的数量。你认为在该实验中至少应取 个水样。