复习与测试优质课教案

复习与检测

一、课题目标：

了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。

二、课题重点和难点：

无菌技术的操作。

三、技能目标：

掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。

一、基础知识：

（一）培养基

培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。

1.培养基的类型和用途

（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。

（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。

（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。

选择培养基

加入青霉素的培养基:

分离酵母菌、霉菌等真菌

加入高浓度食盐的培养基:

分离金黄色葡萄球菌

不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌

不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物

加入青霉素等抗生素的培养基: 分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞

合成培养基:

根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。

合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。

优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低

缺点：

缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。

天然培养基：

天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。

优点：营养成分丰富，培养效果好

缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;

人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。

血清中含有：

①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）

②多种金属离子；

③激素；

④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。

⑤各种生长因子

⑥转移蛋白

⑦不明成分

（二）无菌技术

1.无菌技术的概念

无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。

2.消毒与灭菌的概念及两者的区别

（１）消毒定义：

利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为高程度消毒（High-level Disinfection）、中程度消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Low-level Disinfection）三种方式。

（2）灭菌的定义：

以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。

灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。

3.常用的消毒与灭菌的方法

(1)消毒的方法：

1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min

2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或

80 ℃

下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源

4、紫外线消毒

(2)灭菌的方法：

1、灼烧灭菌

2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。

3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min. 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。

有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。

而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。

问题探讨

1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？

2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？

5.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？

6.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？

7.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？

巩固练习

例1．关微生物营养物质的叙述中，正确的是

A.是碳源的物质不可能同时是氮源

B.凡碳源都提供能量

C.除水以外的无机物只提供无机盐

D.无机氮源也能提供能量

例2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是

A.防止杂菌污染

B.消灭杂菌

C.培养基和发酵设备都必须灭菌

D.灭菌必须在接种前

板书设计

复习与检测

1·培养基种类

2·无菌技术

（1）

消毒

（2）

灭菌

（3）

消毒与灭菌的区别