课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数板书设计

专题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一

筛选菌株

1筛选菌株

(1) 自然界中目的菌株的筛选

①原理：根据目的菌对 的要求，到相应的环境中去找。

②实例：DNA多聚酶链式反应（PCR）是一项 的技术，

要求使用 。

能产生耐高温的TaqDNA聚合酶的 就是从热泉中筛选出来的

(2)实验室中微生物筛选的原理

人为提供有利于________生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时________或________其他微生物生长。

(2)分解尿素的细菌的分离原理

尿素是一种农业 ，只有被 分解成 之后，才能被植物吸收利用。

土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们体内能合成________，将尿素分解的反应式是_________________________________________。

2选择培养基

在微生物学中，将允许__________种类的微生物生长，同时________或

________其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

二

统计菌落数目

常用来统计样品中活菌数目的方法是 ，也叫 。即当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。

测定微生物数量的常用方法还有 直接计数

判断正误

1选择培养基筛选出的微生物只有一种（ ）

2筛选分解尿素的细菌的培养基上不需要添加尿素（ ）

3只要培养基中有尿素就可以筛选出分解尿素的细菌（ ）

4 稀释涂布平板法既可用于统计活菌数也可用于统计样品中死菌数（ ）

5统计菌落数目也可以用平板划线法（ ）

一

选择培养基

1分解尿素的细菌的培养基配方（分析P22左侧培养基配方）

（1）该培养基中含有微生物生长所需的 等营养，

从物理性质划分该培养基属于 ，从功能划分该培养基属于 （2）在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别 和 。

（3）想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用?如果具有，又是如何进

行选择的? 2选择培养基的制作

（1）在培养基全部成分具备的前提下加入其他物质

在培养基中加入 可筛选金黄色葡萄球菌

在培养基中加入 可筛选出 而抑制细菌放线菌生长

（2）通过改变培养基的营养成分达到分离微生物

培养基中缺乏氮源可分离 培养基中缺乏有机碳源可分离

（3）利用培养基中特定化学成分分离特定微生物

培养基中石油是唯一碳源可分离

培养基中尿素是唯一氮源可分离

（4）通过某些特殊环境分离微生物

在高盐环境中可分离 在高温环境中可分离

二

统计菌落数目

1尝试解释为什么统计菌落数目可以用稀释涂布平板法而不能用平板划线法？

2比较显微镜直接计数与稀释涂布平板法计数

项目

显微镜直接计数法

稀释涂布平板法

利用特定细菌计数板或当样品的 时，培养基表面生血细胞计数板，在显微长的 ，来源于样品稀释液中的

原理

镜下计算一定容积的样一个活菌。通过统计平板上的 ，品中微生物的数量

就能推测出样品中大约含有多少活菌。

主要用具

血细胞计数板

固体

培养基

计数依据

优点

缺点

计数方便，操作简单

计数的是

、活菌都计数在内

操作较复杂，有一定误差

3一般来说，统计的菌落数往往比活菌的实际数目

。这是因为

。因此，统计结果一般用

而不是活菌数来表示。

4统计菌落数目（如何推测出每克样品中的菌株数）

（1）分析教材中哪位同学的结果更接近真实值，是否改进如果需要如何改进？

（2）推测出每克样品中的菌株数（并分析分别代表的含义）

显微镜直接计数法：每毫升原液含菌数=400x1000x每小格平均菌体数x稀释倍数

稀释涂布平板法：

（3）如何增加实验的说服力？

三

设置对照

1设置对照的主要目的是排除实验组中

对实验结果的影响，提高实验结果的

。

2分析A同学的结果出现的可能原因？如何设置对照排出影响因素？

一

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

阅读教材P23 “实验设计”，能够整理归纳出实验设计包括的内容，

1实验流程

2实验设计

包括的内容有： 、 、 和 ，具体

的实验步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。

实验设计原则：设计重复组（3个）

设计 。

3实验步骤

（1）土壤取样：土壤有 之称，土壤中微生物 ，在

表层，有更多的微生物生长，土壤中的微生物大约 是细菌，细菌适宜生活在 取样：从肥沃、湿润的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土取距地表约 的土壤层，迅速取土壤并装入____________密封

（2）样品稀释

稀释原因：样品稀释程度直接影响 ，

稀释标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在 ，适于计数的平板

稀释倍数：测定细菌：选用稀释 倍

，测定放线菌：选用稀释 倍 测定真菌：选用稀释 倍

（3）微生物的培养与观察

培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养 和培养 。

细菌： 放线菌： 真菌： 观察：在实验过程中，一般每隔 统计一次 数目，选取菌落数目

的记录作为结果，这样可以 。

菌落特征： （4）细菌的计数

当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在 下，至少对 个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

阅读教材P23-24 “实验设计”，能够整理归纳出细菌分离与计数的流程

2准备培养基

（1）制备____________培养基作为对照组，尿素为唯一氮源的培养基作为________，用来判断选择培养基是否具有____________。

①判断培养基中是否有杂菌污染，需 同时进行培养。[来源:Z.xx.k.Com]

②判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上的 ，进行对比得出结论。46[来源:Z。xx。k.Com]

（2）在稀释倍数为10～10范围内的要分别涂布，而每个稀释度下需要______

个选择培养基、________个牛肉膏蛋白胨培养基，因此需要9个选择培养基和3个牛肉膏蛋白胨培养基。

3样品的稀释与涂布平板：参考教材23页图2-7实验流程示意图，

在上述选择培养基每3个一组分别用记号笔记上10稀释度

将10 g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(锥形瓶体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液1 mL，转移至盛有________ mL生理盐水的无菌大试管依次等比稀释至10稀释度，并按照由10～10稀释度的顺序分别吸取______mL进行平板涂布操作，对应放入已写好的稀释度的平板中，用无菌涂布器在培养基表面涂布均匀。

说明：图中的每一个稀释度下的3个平板是________ ____，每一个稀释度

下还需做 ____________________作对照，判断选择培养基是否具筛选作用。

另外每一个稀释度下还可以两个空白对照，即不涂布稀释后菌液的选择培养

基和牛肉膏蛋白胨培养基，验证培养基中是否____________。[来源:学&科&网]4、10、1056倍的三种646

4将涂布好的培养皿放在30-37℃温度下培养1-2d，及时观察和记录。

5菌落计数

阅读教材P26 “操作提示”，能够整理归纳出相关的内容，

1无菌操作

（1）取土样用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都要________。

（2）应在________旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入________中，塞好棉塞。

（3）在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在________旁操作。

2做好标记

（1）实验时要对________做好标记。注明____________________________等。

3制定计划

（1）为了提高效率，在操作时更加有条不紊，应当_______________。

例如：第一天 第二天

第三天 【预习自测】

1、下列关于从土壤中分离细菌的操作步骤中，正确的是①土壤取样②称取10g

土壤取出加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1mL进行平板涂布

④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度[来源:Z_xx_k.Com]

A．①→②→③→④B.①→③→②→④C．①→②→④→③

D．①→④→②→③

2、在做分离分解尿素的细菌实验时，A同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的结果产生原因可能有（ ）

①土样不同

②培养基污染

③操作失误

④没有设置对照

A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④

内容

结论分析

对照的培养皿中________菌落生长→未被杂菌污染

有无杂菌污染的判断

培养皿中________菌落生长→被杂菌污染[来源:学,科,网Z,X,X,K]

对照无菌落实验组菌落形态多样，菌落数偏高→培养物中混入______ 选择培养基的筛选作用

样品的稀释操作

牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目________选择培养基的数目→选择培养基具筛选作用，已筛选出一些菌落

得到2个或2个以上菌落数目在________的平板→操作成功，能进行菌落的计数

若选取同一种土样，统计结果应________；如果结果相差太远，说明实验操作过程中出现操作失误，需要找出产生差异的原因

重复组的结果

三课题延伸（分解尿素的细菌的进一步鉴定）

1原理

CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3，在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的________将尿素分解成了________。氨会使培养基的碱性增强，________升高。因此，我们可以通过检测培养基____________来判断该化学反应是否发生。

2鉴定

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入________指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将________，这样，我们就可以准确地鉴定该种细菌能够分解尿素。